[發(fā)明專利]一種利用干細(xì)胞構(gòu)建的人源化乙型肝炎鼠模型及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710130633.8
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN107080757A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李君;李江;孫蘇婉;李蘭娟;夏寧邵;程通;袁倫志
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué);廈門大學(xué)
• 主分類號: A61K35/76
• 分類號: A61K35/76;A61K35/28;A61K49/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司33212
• 代理人: 唐銀益,李亦慈

本發(fā)明公開了一種利用干細(xì)胞構(gòu)建的人源化乙型肝炎鼠模型及應(yīng)用，包括獲取人干細(xì)胞，將人干細(xì)胞植入肝損傷的鼠，致使鼠體內(nèi)存在移植的人干細(xì)胞1×10^4?8等步驟，可在進(jìn)行抗病毒藥物耐藥性研究、進(jìn)行慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制研究等方向的應(yīng)用。本發(fā)明所公開的人源化慢性乙型肝炎鼠模型除了用于研究乙肝病毒感染機(jī)制外，還可用于治療的研究。針對目前乙肝藥物的開發(fā)，大多基于肝細(xì)胞水平，缺乏有效的動物模型進(jìn)行藥物的全面評估。該模型簡單易得，很好的模擬了人體感染乙肝病毒的應(yīng)答反應(yīng)，對于慢性乙型肝炎藥物的研發(fā)具有重大意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)、再生醫(yī)學(xué)和病毒學(xué)領(lǐng)域，具體地說，是一種基于干細(xì)胞技術(shù)構(gòu)建的人源化慢性乙型肝炎模型。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒(HBV)流行范圍廣，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國有1億左右的乙肝病毒感染者。由于慢性乙型肝炎無法徹底治愈，給社會、家庭和患者帶來了沉重負(fù)擔(dān)。同時，因?yàn)橐倚透窝撞《局荒茉诟呒夓`長類動物中致病，動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统Ｐ枋褂迷澈镱悇游?，猿猴類?shí)驗(yàn)成本高，操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)周期長。而目前較為常用的鴨乙型肝炎模型是基于禽類載體，與人類的種屬差異大，具有較大的局限性。由于慢性乙型肝炎難以治愈，根據(jù)2015年世界衛(wèi)生組織報告，約有30％的乙肝患者會進(jìn)入肝硬化和肝癌，對患者生命健康造成重大威脅。而目前常用的肝硬化動物模型，均為手術(shù)(如膽總管結(jié)扎)和化學(xué)藥物(四氯化碳、二甲基亞硝胺等)，這一類肝硬化模型為非乙肝病毒所致，故在疾病的機(jī)制與轉(zhuǎn)歸上與乙肝所致的肝硬化有很大的差異，不適合用于研究乙肝肝纖維化、肝硬化發(fā)生發(fā)展的機(jī)制與治療。在我國肝癌患者中，由乙肝引起的原發(fā)性肝癌占肝癌的絕大多數(shù)，原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，病死率高，早期診斷困難。其它利用小動物構(gòu)建的肝癌模型多基于化學(xué)藥物，這類模型與基于HBV感染引起的肝癌模型有很大區(qū)別，尤其是在發(fā)病機(jī)制上，存在明顯的差異。

因此，建立能感染乙型肝炎病毒并致病的小型哺乳動物模型有很大的科學(xué)意義和應(yīng)用價值。但由于乙肝病毒無法感染小型哺乳動物，因此小型哺乳動物研究模型建立困難，嚴(yán)重阻礙了肝臟疾病發(fā)生進(jìn)展機(jī)制、治療和轉(zhuǎn)歸的研究，并很大程度上限制了治療方案的優(yōu)化。建立人源化慢性乙型肝炎鼠模型將為研究病毒性肝炎機(jī)制及其治療與疾病轉(zhuǎn)歸提供良好的研究載體。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有潛在分化能力，可以分化成成熟肝細(xì)胞，我們之前的研究發(fā)現(xiàn)人骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞(hBMSC)能嵌合在肝損傷的鼠肝內(nèi)，嵌合率高達(dá)50-95％，為建立新型人源化鼠模型奠定了基礎(chǔ)，此鼠模型對闡明慢性乙型肝炎病毒生物學(xué)特性、發(fā)病機(jī)制、研發(fā)和篩選治療新藥物等提供保障，為研究肝炎及其治療與疾病轉(zhuǎn)歸提供良好的研究載體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明正是針對現(xiàn)有原發(fā)性肝癌模型的缺陷，提供了一種人源化乙型肝炎鼠模型，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明公開了一種利用干細(xì)胞構(gòu)建的人源化慢性乙型肝炎鼠模型，所述的鼠模型由以下步驟獲得：

1)、獲取人干細(xì)胞；

2)、將人干細(xì)胞植入肝損傷的鼠，致使鼠體內(nèi)存在移植的人干細(xì)胞1*10^{4^8}；

3)、人肝細(xì)胞嵌合：鼠肝臟內(nèi)，移植的人干細(xì)胞分化形成人肝細(xì)胞；人源化的免疫系統(tǒng)：鼠體內(nèi)，移植的人干細(xì)胞分化形成人免疫系統(tǒng)；

4)、HBV感染人源化鼠；

5)、HBV感染的確認(rèn)、肝臟疾病的確認(rèn)。

作為進(jìn)一步地改進(jìn)，本發(fā)明所述的人干細(xì)胞的來源是健康人分離培養(yǎng)的干細(xì)胞或商品化的細(xì)胞系。

作為進(jìn)一步地改進(jìn)，本發(fā)明所述的肝損傷的鼠包括化學(xué)藥物所致的肝臟化學(xué)損傷和外科手術(shù)所致的肝臟物理損傷，鼠是正常小鼠或免疫缺陷小鼠或正常大鼠或免疫缺陷大鼠。

作為進(jìn)一步地改進(jìn)，本發(fā)明所述的步驟3)中，移植的人干細(xì)胞分化形成人肝細(xì)胞，干細(xì)胞可表達(dá)人肝細(xì)胞標(biāo)志物是HSA，HLA，ALB或NTCP等。