[發明專利]一種改進的抗VEGFR?2單克隆抗體

有效

• 申請號: 201710130518.0
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106674349B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 周海平;谷香果;白義
• 申請（專利權）人: 北京東方百泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C12N15/12;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00;A61P27/02
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技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，具體涉及本發明涉及一種改進的抗VEGFR-2單克隆抗體。

背景技術

腫瘤生長依賴新生血管的形成已經在腫瘤生物學上研究的比較透徹。血管生成可提供氧氣、營養物質、生長因子、荷爾蒙及蛋白水解酶,從而促進腫瘤細胞向遠處擴散和轉移，加速腫瘤的生長和惡化。血管生成是一個高度復雜的動態過程,由許多促/抗血管生成分子調節。血管生成的開關被認為是促血管生成超過抗血管生成的一個惡性標志。VEGF/VEGFR軸觸發多重信號網絡,導致上皮細胞存活、有絲分裂、轉移和分化、血管滲透，VEGF及其受體在正常和病理血管生成中發揮著中樞作用。在人類許多種癌癥中,增加的腫瘤血管化作用和腫瘤促血管生成因子的表達被證實與腫瘤的分級和惡性與否有關。

血管內皮細胞生長因子(VEGF)又稱血管通透因子,它是內皮細胞的特異性有絲分裂源,也是一種有效的血管形成和通透性誘導因子，已被鑒定的相應受體為VEGFR-1(Flt-1，FMS樣酪氨酸激酶1)，VEGFR-2(又稱為KDR/Flk-1,激酶插入嵌合受體、胎肝激酶-1)，VEGFR-3(Flt4)，神經纖維蛋白-1(neuropilin-1)，神經纖維蛋白-2。VEGFR-2是血管內皮細胞上的主要VEGF受體，是一種糖蛋白，其胞外區含有七個免疫球蛋白樣區(含配體結合域和受體二聚化結構域)，胞內插入了酪氨酸激酶催化結構域，主要在內皮細胞上表達，其他如巨核細胞、視網膜遠祖細胞、間充質干細胞，腫瘤細胞如黑色素瘤細胞、腦瘤和某些白血病細胞等。VEGF和VEGFR-2受體作為關鍵的血管內皮細胞特異因子信號傳導途徑的分子參與腫瘤新生血管的生成，VEGF的主要生物學功能都是通過VEGFR-2實現，VEGFR-2和VEGF結合后發生二聚體化，并且VEGFR-2胞內的酪氨酸殘基自身磷酸化，從而激活并將細胞膜/細胞質激酶級聯反應信號傳遞到細胞核，可引發內皮細胞的一系列變化，包括血管內皮細胞增殖、存活、細胞骨架重排、細胞遷移以及基因表達等，并最終引起血管增生。

由于VEGF/VEGFR2信號通路在腫瘤的發生發展中的關鍵作用，因此有不少針對VEGF/VEGFR2的信號通路的藥物，如抗VEGF抗體貝伐單抗和抗VEGFR-2的抗體雷莫蘆單抗。

抗體是生物醫藥中技術含量最高、難度最大的一類藥物，從2012年起，全球銷售排名前十名的單藥中有六個是抗體類藥物，因此，抗體類藥物市場的發展潛力巨大。抗體藥物篩選最普遍應用的技術是噬菌體抗體庫技術，噬菌體抗體庫技術是繼噬菌體展示技術發展而來的一項基因抗體工程的新技術，它可將含不同物種的全部抗體可變區基因的基因庫轉化成展示在噬菌體表面的蛋白庫，不僅使單克隆抗體的生產更方便、快速、高效地在體外進行,還開辟了單克隆抗體人源化的新途徑,促進了人類單克隆抗體生產的發展。我公司專利號為CN103333247B的專利就是通過計算機輔助設計和噬菌體抗體庫技術篩選得到的一系列抗VEGFR-2的抗體，為獲得抗VEGFR-2的抗體藥物奠定了基礎，我公司在進一步地研究中發現，上述專利中涉及的抗體在親和力和生物學活性等方面還存在進一步的提升可能，基于此，我們在原有的研究基礎上，對上述抗體進行了改進性優化。

發明內容

本發明提供了一種改進的抗VEGFR-2單克隆抗體；本發明以CN103333247B專利中親和力最高的兩個為模板，進行計算機輔助模擬設計，設計了新的噬菌體抗體庫，并進行了多輪篩選，得到了一株親和力和生物學活性均高于原專利抗體的新的抗VEGFR-2單克隆抗體。

為實現上述目的，本發明提供了一種改進的抗VEGFR-2單克隆抗體，包括：

輕鏈和重鏈；所述輕鏈可變區的氨基酸序列包含SEQ NO.1、SEQ NO.2或SEQNO.3中的任一種；所述重鏈可變區的氨基酸序列包含SEQ NO.4。

其中，本發明還提供了一種包含上述輕鏈可變區或上述重鏈可變區的抗體、多肽或蛋白。

其中，本發明還提供了一種包含上述輕鏈可變區或上述重鏈可變區氨基酸序列的多核苷酸序列或組合。

其中，本發明還提供了一種包含上述多核苷酸序列或組合的重組DNA表達載體；所述重組DNA表達載體的DNA序列中包含編碼抗VEGFR-2抗體的上述重鏈可變區、重鏈恒定區、輕鏈可變區和輕鏈恒定區的氨基酸序列。

其中，本發明還提供了一種轉染上述重組DNA表達載體的宿主細胞，所述宿主細胞包含哺乳動物細胞、昆蟲細胞、大腸桿菌或酵母；優選哺乳動物細胞；進一步優選HEK293E細胞、CHO細胞或NS0細胞。