[發明專利]一種苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710127819.8
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN107022606A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 張放;邵華;薄存香
• 申請（專利權）人: 山東省職業衛生與職業病防治研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙)11316
• 代理人: 滑春生,趙永偉

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和基因工程技術，具體涉及一種苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒，根據檢測結果從基因層面早期發現苯乙烯中毒易感者，并據此進行預防方面的方向指導。

背景技術

苯乙烯是一種重要的化工原料及產品，在職業環境及生活環境中廣泛存在，長期接觸苯乙烯可以導致苯乙烯中毒，中毒癥狀包括；神經衰弱、粘膜刺激、造血系統損害。苯乙烯中毒可嚴重降低接觸人群的生活質量。據統計，在我國苯乙烯生產及下游行業中，接觸工人已超過50萬。由于苯乙烯為各種艇類、高速列車、地鐵車廂生產中主要的交聯劑及稀釋劑，隨著我國有關行業的高速發展，苯乙烯職業接觸工人數量在近幾年處于持續增長中。因此，對苯乙烯引起的職業性危害的防治應引起重視。細胞色素P4502E1（CYP2E1）基因編碼的氧化酶是環境毒物活化的關鍵酶之一，是體內重要的I相代謝酶，在苯乙烯代謝過程中，主要催化苯乙烯生成毒性更強的中間代謝產物環氧苯乙烯，后者繼續代謝，最后主要生成代謝終產物苯乙醇酸和苯乙醛酸，隨尿排出。因此，在接觸苯乙烯濃度相同或相似條件下，CYP2E1酶活性越強，生成的環氧苯乙烯量越多，代謝終產物含量也相應增多。現有檢測遺傳易感性的方法多為采集靜脈血淋巴細胞中DNA進行基因易感性檢測，具有有創傷、可能造成交叉感染等缺點。現在尚未見苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒的研制。

綜上所述，開展苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒的研制，在前期的研究基礎上，通過口腔黏膜細胞采樣，檢測與苯乙烯中毒發生密切相關基因的單核苷酸多態性，從基因水平來評估苯乙烯中毒發生的風險性，從而早期發現苯乙烯中毒易感者，保護易感人群。并可以減少采樣痛苦、避免交叉感染。對于降低苯乙烯中毒發病率，提高勞動者職業健康水平具有重要意義。

發明內容

基于CYP2E1基因上5^，端上游調節區RsaI（rs2031920）、EPHX1基因上T/C（rs1051740）及A/G（rs2234922）的3個單核苷酸多態性位點可用來評估苯乙烯中毒的遺傳易感性，本發明提供一種苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒。

本發明旨在提供苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒，所述苯乙烯中毒遺傳易感性無創檢測試劑盒包括：檢測CYP2E1基因上5^，端上游調節區RsaI rs2031920、EPHX1基因上T/C rs1051740及A/G rs2234922的3個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物對、2×PCR Mix、PCR反應緩沖液、FastDigest-RsaI核酸內切酶、FastDigest-EcoRV核酸內切酶、ddH₂O。

進一步，所述的特異性引物對是指針對CYP2E1基因上5^，端上游調節區RsaI rs2031920、EPHX1基因上T/C rs1051740及A/G rs2234922的3個單核苷酸多態性位點，通過PCR反應特異性擴增出包含這3個SNPs位點DNA片段的引物對。

進一步，所述的PCR產物酶切組件是針對CYP2E1基因上5^，端上游調節區RsaI rs2031920、EPHX1基因上T/C rs1051740及A/G rs2234922的3個單核苷酸多態性位點而配置，通過PCR-RFLP技術特異性地檢測出上述3個SNPs位點的基因型。

進一步所含的3對特異性引物序列如下：

CYP2E序列SEQ ID NO：1

正向引物序列：5′-TTCATT GTGTCTTCTAACTGG-3′

反向引物序列：5′-CCAGTCGAGTCTTACATTGTCA-3′

EPHX1 序列SEQ ID NO：2

正向引物序列：5′-GATCGATAAGTTCCGTTTCACC-3′

反向引物序列：5′-AATCTTAGTCTTGAAGTGAGGGT-3′

EPHX1 序列 SEQ ID NO：3

正向引物序列：5′-ACATCCACTTCATCCACG-3′

反向引物序列：5′-ATGCCTCTGAGAAGCCAT-3′

進一步，試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系，反應體系為總體積25μl，內含正、反向引物濃度20μM各0.25μl、2×PCR Mix12.5μl，DNA模板1μl，ddH₂O15μl；