[發明專利]DKK-3基因甲基化診斷試劑體系、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710124950.9
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106967792B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 劉鵬飛;王菁蕊;劉寶利;韓雪
• 申請（專利權）人: 天津脈絡生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京格旭知識產權代理事務所(普通合伙) 11443
• 代理人: 雒純丹

本發明屬于分子診斷領域，具體涉及一種DKK?3基因啟動子區甲基化診斷試劑體系、試劑盒及其應用。本發明的DKK?3基因啟動子區甲基化診斷試劑體系，包括檢測DKK?3基因啟動子區甲基化的探針序列SEQ ID NO.1和檢測DKK?3基因啟動子區非甲基化的探針序列SEQ ID NO.2。本發明同時提供了含有以上所述的試劑體系的DKK?3基因啟動子區甲基化診斷試劑盒。同時，還提供了以上試劑體系或者試劑盒在制備用于宮頸癌檢測和/或診斷的試劑領域中的應用。通過檢測DKK?3基因啟動子區甲基化水平有效的指導宮頸癌的早期診斷、治療和評估預后。而且可以實現及時、特異、便捷的診斷。

技術領域

本發明屬于分子診斷領域，涉及一種用于宮頸癌診斷、治療和預后評估的試劑體系，具體涉及一種DKK-3(Dipkkopf相關蛋白3)基因甲基化診斷試劑體系、試劑盒及其在宮頸癌檢測和/或診斷的試劑領域中的應用。

背景技術

宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌，高居女性惡性腫瘤的第二位。據世界范圍內的統計，每年大約有50萬左右的宮頸癌新發病例，占所有癌癥新發病例的5％，其中80％的病例發生在發展中國家。全世界每年死于宮頸癌的患者約24萬人。我國每年宮頸癌的新發病例數約為13 萬，死亡約5萬例，盡管近年來宮頸癌的診斷和治療技術取得了巨大的進步，宮頸癌仍然是一種嚴重威脅婦女健康的疾病。

腫瘤的發生是一個復雜的過程，包括了多階段、多基因的改變，由宮頸上皮內瘤變、早期浸潤癌、到浸潤癌的連續發展是宮頸癌的發生過程。腫瘤的發生、發展經歷了由量變到質變，漸變到突變的過程。手術治療為主，輔以放化療仍是目前宮頸癌的治療手段，然而這些治療方式具有極大的副作用，并不是所有患者都能適應。所以目前宮頸癌治療研究的重點轉向了新型的，副作用小的治療。減少宮頸癌發病率的關鍵是對宮頸病變早期進行及時高效的篩查和正確的處理。

宮頸癌的病因一直受到國內外學者所廣泛研究，其中人類乳頭狀瘤病毒 (HPV)感染是主要病因之一。雖然宮頸病變患者幾乎都能檢測到人類乳頭狀瘤病毒(HPV)感染，但HPV的檢出率在宮頸正常的婦女中也較高。HPV感染的人群中即使感染了HPV高危亞型者最終僅有不足5％的發展為宮頸上皮內瘤變，僅有0.5％-1％的患者最終發展成宮頸浸潤癌。由此可見HPV感染是宮頸癌發生發展的必須原因，但卻不是充分的原因，還需其他輔助因素參與其發生發展的過程。

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要機制之一，國內外在近年來的研究中發現在宮頸癌的發生發展過程中出現多種基因的甲基化，而且宮頸癌的病變程度與這種表觀遺傳學的改變呈現一定的相關性。隨著人們對DNA甲基化在腫瘤發生相關基因表達的影響的重視程度不斷提高，對各類腫瘤疾病DNA甲基化的分析已經成為當前腫瘤分子生物學的一個研究熱點，然而目前報道的癌癥相關基因眾多，基于DNA甲基化的疾病檢測方法往往涉及眾多基因，造成成本過高，難以普及。

Dipkkopf相關蛋白3(DKK-3)是新近發現的抑癌基因，屬于DKK基因家族成員之一，經典的DKK家族被認為是Wnt信號傳導通路的調控因子，但目前對DKK-3的功能尚未完全清楚，大多數研究表明其具有促進細胞凋亡和腫瘤血管產生的作用，在多種腫瘤細胞中表現為低表達狀態其甲基化沉默時導致失去對細胞周期的調控而發生癌變，與腫瘤的發生、進展與轉歸緊密相關。其基因啟動子區甲基化在多種腫瘤中可反映病情及預后，成為腫瘤基因水平的標志物。

為了提高宮頸癌的診療效率，提高宮頸癌患者的生存率，尋找一種有效的用于宮頸癌早期診斷的方法是十分必要的，而DKK-3基因啟動子區的甲基化檢測則具有重要的研究價值及應用前景。

發明內容

本發明所解決的技術問題為：彌補現有技術對于宮頸癌診療的不足，提高宮頸癌的診療效率。

本發明的目的在于提供一種可用于宮頸癌早期診斷的分子靶標。與傳統的診斷方法相比，采用分子標記物來診斷宮頸癌具有及時性，特異性，便捷性的優點，從而使患者在疾病早期能夠預知疾病風險，并針對疾病具體特征采取特異性的治療措施。