[發(fā)明專利]ATP核酸適配體、利用納米金顯色檢測ATP的方法及試劑盒

有效

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• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106967721B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張晶珠;樊婷婷;毛瑜;李露露
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市坤健創(chuàng)新藥物研究院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N21/33
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 張清芳

本發(fā)明提供ATP核酸適配體、利用納米金顯色檢測ATP的方法及試劑盒。該ATP核酸適配體具有如SEQ ID NO：1所示堿基序列。本發(fā)明提供一種利用納米金顯色檢測ATP的方法，該方法包括以下步驟：(1)使含有ATP的待測溶液與含有上述的ATP核酸適配體的檢測溶液混合；(2)將步驟(1)得到的混合液與納米金溶液混合，然后加入鹽溶液并混勻；(3)儀器檢測或觀測步驟(2)得到的混合溶液。利用本發(fā)明的方法對ATP進行測定，不需要任何化學(xué)修飾，沒有復(fù)雜的反應(yīng)過程，也不需要昂貴的儀器，甚至可以通過肉眼觀測，操作簡便，成本低。該方法檢測時間短，使用方便，靈敏度高，特異性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及ATP核酸適配體、利用納米金顯色檢測ATP的方法及試劑盒。

背景技術(shù)

ATP作為所有生物體生存和繁殖的細胞合成中必不可少的普遍能量來源，在機體代謝過程中扮演著非常重要的角色。研究表明ATP可以作為細胞存活率和細胞損傷的指示劑。ATP在細胞中的異常濃度和許多疾病，比如腫瘤，心血管疾病，帕金森綜合征等有著密切的聯(lián)系。因此，對ATP快速準確的檢測在臨床應(yīng)用上有著重大的意義。

目前已有的ATP的檢測方法主要包括HPLC法、熒光素/熒光素酶法以及電泳法。這些方法的靈敏度和特異性都很好，但是需要昂貴的儀器和繁瑣的操作步驟，并且耗時耗力。

核酸適配體(Aptamer)是一段DNA，RNA或者是XNA序列。通常是利用體外篩選技術(shù)-指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(Systematic evolution of ligands by exponentialenrichment，SELEX)，從核酸分子文庫中得到的寡核苷酸片段。核酸適配體能與多種目標物質(zhì)高特異性、高選擇性地結(jié)合，因此被廣泛應(yīng)用于生物傳感器領(lǐng)域。相對于傳統(tǒng)的抗原-抗體反應(yīng)，核酸適配體更容易合成，更穩(wěn)定，成本更低，而且擁有與抗原-抗體反應(yīng)相匹敵的特異性和靈敏度。這些優(yōu)勢使核酸適配體成為了各種化學(xué)分子探測的有力武器。基于核酸適配體的生物傳感器受到了人們越來越多的關(guān)注和研究應(yīng)用。這些生物傳感器主要分為：熒光法、電化學(xué)法、化學(xué)發(fā)光法以及比色法。其中比色法相對于其它方法有許多優(yōu)勢，比如成本低，操作簡單，結(jié)果容易讀取等。在未來的分析檢測領(lǐng)域甚至臨床應(yīng)用方面有著很好的前景。

納米金是指金的微小顆粒，其直徑在1-100nm，其顏色依直徑大小而呈紅色至紫色。由于其特殊的物理化學(xué)性質(zhì)，比如高消光系數(shù)、強大的距離相關(guān)的光學(xué)性質(zhì)、低成本等，使其在比色法的檢測手段中作為信號顯示劑非常具有競爭力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、靈敏度高、特異性好、成本低的ATP檢測方法。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供一種ATP核酸適配體(或稱DNA探針)，該ATP核酸適配體具有如SEQ ID NO：1所示堿基序列。5’-ACCTTCCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’(SEQ ID NO：1)。

通過對ATP核酸適配體序列的優(yōu)化，能夠提高檢測的特異性和靈敏度。

根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供一種利用納米金顯色檢測ATP的方法，該方法包括以下步驟：

(1)使含有ATP的待測溶液與含有上述的ATP核酸適配體的檢測溶液混合；

(2)將步驟(1)得到的混合液與納米金溶液混合，然后加入鹽溶液并混勻；

(3)儀器檢測或觀測步驟(2)得到的混合溶液。

優(yōu)選地，步驟(1)中，含有ATP的待測溶液中的ATP與含有ATP核酸適配體的檢測溶液中的ATP核酸適配體的摩爾比為1：1-1000，優(yōu)選為1：50-200。

優(yōu)選地，步驟(1)中，含有ATP核酸適配體的檢測溶液中ATP核酸適配體的濃度為0.1μM-10μM，含有ATP適配子的檢測溶液優(yōu)選為Tris-HCl緩沖液。