[發明專利]一種玉米赤霉烯酮單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710124541.9
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106950375B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 李成洪;龍定彪;宋青龍;唐紅梅;唐達;傅巍;張海燕;李悅
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院;北京龍科方舟生物工程技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/14;G01N33/577
• 代理公司: 北京世譽鑫誠專利代理事務所(普通合伙) 11368
• 代理人: 張海燕

本發明公開了一種玉米赤霉烯酮單克隆抗體及其應用，該玉米赤霉烯酮單克隆抗體是由保藏編號為CGMCC No.13281的雜交瘤細胞克隆得到的，可用于定性檢測玉米赤霉烯酮，不僅靈敏度更高，而且最低檢測限更低。本發明的有益之處在于：因為采用保藏編號為CGMCC No.13281的雜交瘤細胞克隆得到了高靈敏度的玉米赤霉烯酮單克隆抗體，所以定性檢測玉米赤霉烯酮時，靈敏度更高，可達到2μg/kg，最低檢測限更低，可達到30μg/kg。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體及其應用，具體涉及一種玉米赤霉烯酮單克隆抗體及其應用，屬于生物工程技術領域。

背景技術

玉米赤霉烯酮的檢測方法主要有：薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、質譜聯用、酶聯免疫吸附法(ELISA)及膠體金免疫層析法。

薄層色譜法(TLC)在處理樣品時工作量大，檢測過程中需接觸標準品，危害到操作人員的健康。

高效液相色譜法(HPLC)、質譜聯用所需檢測儀器價格昂貴，需要專業技術人員操作，且樣品前處理復雜，不便推廣應用，也不適合大批量樣品檢測。

酶聯免疫吸附法(ELISA)需要專業技術人員操作，同時對檢測條件有較嚴格的要求，每次檢測都需同時做標準品，檢測成本稍高。

膠體金免疫層析法操作簡便、快速、靈敏度高，且無需貴重儀器設備，人員參照說明書即可操作，一份樣本也可進行檢測，成本低，因此發展迅速。

但是，現有玉米赤霉烯酮膠體金檢測試劑盒最低檢測限不能滿足糧食類檢測要求，且只適用于谷物類樣本的檢測。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種玉米赤霉烯 酮單克隆抗體及其應用，該單克隆抗體可用于定性檢測玉米赤霉烯酮，不僅靈敏度更高，而且最低檢測限更低。

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：

一株雜交瘤細胞，其特征在于，能夠分泌高靈敏度和特異性的玉米赤霉烯酮單克隆抗體，保藏編號為CGMCC No.13281。

一種玉米赤霉烯酮定性檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒中含有由前述的雜交瘤細胞克隆得到的玉米赤霉烯酮單克隆抗體。

前述的玉米赤霉烯酮定性檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：提取液、稀釋液和檢測卡，其中，

前述提取液為60v/v％甲醇水溶液；

前述稀釋液為0.02M、pH7.4的磷酸鹽緩沖液；

前述檢測卡由PVC底板(1)、樣品墊(2)、膠體金結合墊(3)、吸水濾紙(4)和NC膜(5)組成，NC膜(5)粘貼在PVC底板(1)的中段，吸水濾紙(4)粘貼在PVC底板(1)的上段，并且吸水濾紙(4)的下端部壓住NC膜(5)的上端部，膠體金結合墊(3)和樣品墊(2)均粘貼在PVC底板(1)的下段，并且膠體金結合墊(3)的上端部壓住NC膜(5)的下端部、樣品墊(2)的上端部壓住膠體金結合墊(3)的下端部，其中，

前述膠體金結合墊(3)做了如下處理：

取1mL濃度為0.01％的膠體金溶液并調節pH值至9.0，將由保藏編號為CGMCCNo.13281的雜交瘤細胞克隆得到的玉米赤霉烯酮單克隆抗體按照3μg/mL標記，然后用終濃度1wt％BSA封閉，離心去 上清液后用PBS洗滌一次，再次離心后用300μL膠體金重懸液懸浮，按10μL/cm噴金量將標記好的玉米赤霉烯酮單克隆抗體包被在膠體金結合墊(3)上，37℃干燥2h；

前述NC膜(5)是通過如下方法制備得到的：