[發明專利]以NCAM?1為檢測指標的金標試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710123596.8
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106885902B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 王艷云;張林;胡懷忠;陶冶;劉毅;趙毅;周斌
• 申請（專利權）人: 四川大學華西第二醫院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙)51211
• 代理人: 史姣姣

1.NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，所述的金標試劑盒通過檢測尿液樣本中NCAM-1作為檢測指標，所述NCAM-1在活躍期狼瘡腎炎患者尿液中的濃度明顯的高于非活躍期狼瘡腎炎患者及未合并狼瘡腎炎的系統性紅斑狼瘡患者尿液中的濃度。

2.根據權利要求1所述的NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，其特征在于：所述金標試劑盒包括底板（7）、吸水墊（6）、硝酸纖維素膜（3）、金標墊（2）和樣品墊（1），所述樣品墊（1）、金標墊（2）、硝酸纖維素膜（3）和吸水墊（6）依次相接覆蓋在底板（7）上，且金標墊（2）被樣品墊（1）部分覆蓋；所述硝酸纖維素膜（3）上設置有由鼠抗人NCAM-1單克隆抗體、兔抗人NCAM-1單克隆抗體，兔抗人NCAM-1多克隆抗體和羊抗人NCAM-1多克隆抗體中的任意一種包被形成的檢測線（4）；由羊抗鼠免疫球蛋白G和羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體中的任意一種包被形成的控制線（5），所述金標墊（2）包被有膠體金與鼠抗人NCAM-1單克隆抗體和兔抗人NCAM-1單克隆抗體中的任意一種偶聯形成的結合物。

3.根據權利要求2所述的NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，其特征在于：所述檢測線（4）、控制線（5）的寬度各控制為0.5 mm～0.8 mm，所述檢測線（4）與控制線（5）之間的間距控制為5 mm～10 mm。

4.根據權利要求2所述的NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，其特征在于：所述試劑盒的制備包括下述步驟：

（1）檢測線、控制線的包被：

以鼠抗人NCAM-1單克隆抗體、兔抗人NCAM-1單克隆抗體、兔抗人NCAM-1多克隆抗體和羊抗人NCAM-1多克隆抗體中的任意一種為溶質，加入緩沖溶液為溶劑，配制成濃度為1～4mg/mL的檢測線溶液；以羊抗鼠免疫球蛋白G多克隆抗體或者羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體為溶質，加入緩沖溶液為溶劑，配制成濃度為0.5～1 mg/mL的控制線溶液；通過劃膜機將制備得到的控制線溶液、檢測線溶液包被在硝酸纖維素膜上，所述硝酸纖維素膜貼在底板上，將完成包被后的硝酸纖維素膜-底板組合體在37℃干燥12～16h；

（2）制備金標墊：

①以鼠抗人NCAM-1單克隆抗體或兔抗人NCAM-1單克隆抗體為溶質，加入緩沖液為溶劑，配制濃度為0.5～2 mg/mL的鼠抗人NCAM-1單克隆抗體溶液或兔抗人NCAM-1單克隆抗體溶液；

②將步驟①中制備得到的鼠抗人NCAM-1單克隆抗體溶液或兔抗人NCAM-1單克隆抗體溶液與適量膠體金溶液混合，制得鼠抗人NCAM-1單克隆抗體或兔抗人NCAM-1單克隆抗體的濃度為10～20μg/mL的混合液；

③將步驟②制備得到的混合液搖床標記20 min～30 min，然后加入濃度為1 mg/mL牛血清白蛋白溶液并繼續搖床標記20 min～30 min，標記結束后離心，獲得的沉淀即為鼠抗人NCAM-1單克隆抗體結合物或兔抗人NCAM-1單克隆抗體結合物；

④將步驟③得到的結合物溶于金標復溶液中，配制成濃度0.2～0.4 mg/mL的金標鼠抗人NCAM-1單克隆抗體或金標兔抗人NCAM-1單克隆抗體結合物溶液，

⑤通過噴金機將金標鼠抗人NCAM-1單克隆抗體或金標兔抗人NCAM-1單克隆抗體結合物溶液噴在制作金標墊的吸水材料上，在37℃干燥12～16h得金標墊；

（3）組合：

將吸水墊、金標墊和樣品墊粘貼步驟（1）得到的硝酸纖維素膜-底板組合體的底板上，即得所述金標試劑盒。

5.根據權利要求4所述的NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，其特征在于：在步驟（1）中，配制檢測線溶液時用緩沖液為磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽緩沖液中的任意一種；配制控制線溶液用緩沖液為磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液中的任意一種；在步驟①中，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽緩沖液中的任意一種。

6.根據權利要求4所述的NCAM-1作為檢測指標在制備檢測狼瘡腎炎活躍度的金標試劑盒中的應用，其特征在于：在步驟③中，所述牛血清白蛋白溶液的加入量以牛血清白蛋白在混合液中的濃度達到0.1 g/100 mL為準。