[發(fā)明專利]以NCAM?1為檢測(cè)指標(biāo)的金標(biāo)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710123596.8
• 申請(qǐng)日: 2017-03-03
• 公開（公告）號(hào): CN106885902B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王艷云;張林;胡懷忠;陶冶;劉毅;趙毅;周斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西第二醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 成都天嘉專利事務(wù)所(普通合伙)51211
• 代理人: 史姣姣

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)用檢測(cè)工具，涉及狼瘡腎炎活躍度的檢測(cè)工具，特別涉及一種以NCAM-1為檢測(cè)指標(biāo)的金標(biāo)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

狼瘡腎炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最常見的并發(fā)癥之一，且狼瘡腎炎所導(dǎo)致的終末期腎病是導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人死亡的主要因素。而從狼瘡腎炎發(fā)展為終末期腎病最主要的原因就是因?yàn)榛钴S期的狼瘡腎炎沒有被及時(shí)發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致了治療不及時(shí)，腎臟引發(fā)不可逆的腎小球硬化以及間質(zhì)血管纖維化。對(duì)于狼瘡腎炎活躍度的判斷，“金標(biāo)準(zhǔn)”是通過腎臟穿刺活檢術(shù)對(duì)腎臟組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，根據(jù)病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行診斷。而腎臟穿刺活檢術(shù)為有創(chuàng)性檢查，禁忌癥較多，無法多次常規(guī)進(jìn)行，因此目前臨床上缺乏無創(chuàng)、準(zhǔn)確、快捷、安全的檢測(cè)方法和工具。

NCAM-1（Neural cell adhesion molecule～1，中文名：神經(jīng)細(xì)胞粘附分子～1）是一種非鈣依賴性粘附因子，在細(xì)胞信號(hào)識(shí)別及傳導(dǎo)、神經(jīng)再生等方面都具有一定的作用。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人在長期的研究中發(fā)現(xiàn)，NCAM-1在活躍期狼瘡腎炎患者尿液中的濃度明顯的高于非活躍期狼瘡腎炎患者及未合并狼瘡腎炎的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者尿液中的濃度，因此，基于這一研究結(jié)果，NCAM-1可作為狼瘡腎炎患者腎炎活躍度的診斷指標(biāo)。

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)通過穿刺活檢術(shù)檢測(cè)狼瘡腎炎活躍度的不足，首次以NCAM-1為檢測(cè)指標(biāo)特定的應(yīng)用到金標(biāo)試劑盒中，得到金標(biāo)試劑盒通過檢測(cè)尿液樣本中NCAM-1濃度為檢測(cè)指標(biāo)，從而判斷狼瘡腎炎活躍度，實(shí)現(xiàn)快速、無創(chuàng)檢測(cè)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)；

NCAM-1為檢測(cè)指標(biāo)在檢測(cè)狼瘡腎炎活躍度的金標(biāo)試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明首次將NCAM-1作為檢測(cè)指標(biāo)，應(yīng)用于金標(biāo)試劑盒，制備得到可用于檢測(cè)狼瘡腎炎活躍度的金標(biāo)試劑盒，該金標(biāo)試劑盒通過檢測(cè)尿液樣本中NCAM-1濃度作為指標(biāo)，從而判斷狼瘡腎炎活躍度。

上述的檢測(cè)狼瘡腎炎活躍度的金標(biāo)試劑盒，包括底板7、吸水墊6、硝酸纖維素膜3、金標(biāo)墊2和樣品墊1，所述樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜3和吸水墊6依次相接覆蓋在底板上，且金標(biāo)墊被樣品墊部分覆蓋；所述硝酸纖維素膜上設(shè)置有由鼠抗人NCAM-1單克隆抗體、兔抗人NCAM-1單克隆抗體，兔抗人NCAM-1多克隆抗體和羊抗人NCAM-1多克隆抗體中的任意一種包被形成的檢測(cè)線；由羊抗鼠免疫球蛋白G和羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體中的任意一種包被形成的控制線，所述金標(biāo)墊包被有膠體金與鼠抗人NCAM-1單克隆抗體和兔抗人NCAM-1單克隆抗體中的任意一種偶聯(lián)形成的結(jié)合物。

使用本發(fā)明所述檢測(cè)工具，當(dāng)質(zhì)控線位置可見一條清晰的紅色線，證明本發(fā)明所述快速檢測(cè)工具有效；在本發(fā)明所述快速檢測(cè)工具有效的情況下，當(dāng)檢測(cè)線位置可見一條清晰的紅色線，此結(jié)果判定為陽性（即該患者處于狼瘡腎炎活躍期）；若檢測(cè)線 位置未出現(xiàn)紅色線，則判定為陰性（即該患者處于狼瘡腎炎非活躍期）。

所述檢測(cè)線、控制線的寬度各控制為0.5 mm～0.8 mm，所述檢測(cè)線與控制線之間的間距控制為5 mm～10 mm。

本發(fā)明的檢測(cè)狼瘡腎炎活躍度的金標(biāo)試劑盒的形狀為一矩形條。所述樣品墊是由具有吸水功能的玻璃纖維、聚酯纖維膜、纖維素濾紙或無紡布制作的墊體。金標(biāo)墊為吸水材料制作，吸水材料包括玻璃纖維、聚酯纖維膜、無紡布或纖維素濾紙等。所述吸水墊6是由吸水紙制作的墊體。

所述試劑盒的制備包括下述步驟：

（1）檢測(cè)線、質(zhì)控線的包被：

以鼠抗人NCAM-1單克隆抗體、兔抗人NCAM-1單克隆抗體，兔抗人NCAM-1多克隆抗體和羊抗人NCAM-1多克隆抗體中的任意一種為溶質(zhì)，加入緩沖溶液為溶劑，配制成濃度為1～4mg/mL的檢測(cè)線溶液；以羊抗鼠免疫球蛋白G多克隆抗體或者羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體為溶質(zhì)，加入緩沖溶液為溶劑，配制成濃度為0.5～1 mg/mL的質(zhì)控線溶液；通過劃膜機(jī)將制備得到的控制線溶液、檢測(cè)線溶液包被在硝酸纖維素膜上，所述硝酸纖維素膜貼在底板上，將完成包被后的硝酸纖維素膜-底板組合體在37℃干燥12～16小時(shí)；

（2）制備金標(biāo)墊：

①以鼠抗人NCAM-1單克隆抗體或兔抗人NCAM-1單克隆抗體為溶質(zhì)，加入緩沖液為溶劑，配制濃度為0.5～2mg/mL的鼠抗人NCAM-1單克隆抗體溶液或兔抗人NCAM-1單克隆抗體溶液；