[發(fā)明專利]高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710121163.9
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106867986B
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 褚偉立;朱國萍;榮東;劉博;蔣棟梁;王鵬;沈小鵬;曹正宇;宋平;扈建斌
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽新熙盟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/92
• 分類號: C12N9/92;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/465
• 代理公司: 11471 北京細(xì)軟智谷知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 王金寶

本發(fā)明涉及一種高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：活化接種、連續(xù)培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)和處理發(fā)酵液，最終得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點，應(yīng)用于果葡糖漿行業(yè)，適合間歇生產(chǎn)F42型果葡糖漿，同時也可使用該葡萄糖異構(gòu)酶一步法生產(chǎn)F55型果葡糖漿。生產(chǎn)F42型果葡糖漿時該產(chǎn)品對葡萄糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低；一次購酶花費少；操作簡單，隨加隨生產(chǎn)，不需維護(hù)和考慮酶活，完全實現(xiàn)該酶國產(chǎn)且生產(chǎn)靈活性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)葡萄糖異構(gòu)酶生產(chǎn)考慮到發(fā)酵酶活力偏低，葡萄糖異構(gòu)酶在液體劑型時穩(wěn)定性差等因素，通常把發(fā)酵結(jié)束時的發(fā)酵液通過化工產(chǎn)品進(jìn)行交聯(lián)固定酶活，烘干后得到固定化葡萄糖異構(gòu)酶，其劑型為固體，目前僅有國外丹麥諾維信、美國杜邦公司供應(yīng)。固定化葡萄糖異構(gòu)酶使用時，必須花費幾十萬上百萬一次購買大量裝柱后方可使用，且使用要求葡萄糖液必須精制達(dá)標(biāo)方可生產(chǎn)果葡糖漿，且生產(chǎn)也要求連續(xù)，葡萄糖液質(zhì)量不達(dá)標(biāo)、間歇生產(chǎn)或使用維護(hù)不當(dāng)，均會導(dǎo)致失效甚至報廢，造成生產(chǎn)巨大損失。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，使用所述生產(chǎn)方法生產(chǎn)得到的葡萄糖異構(gòu)酶，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點，應(yīng)用于果葡糖漿行業(yè)，適合間歇生產(chǎn)F42型果葡糖漿，同時也可使用該葡萄糖異構(gòu)酶一步法生產(chǎn)F55型果葡糖漿。生產(chǎn)F42型果葡糖漿時該產(chǎn)品對葡萄糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低；一次購酶花費少；操作簡單，隨加隨生產(chǎn)，不需維護(hù)和考慮酶活，完全實現(xiàn)該酶國產(chǎn)且生產(chǎn)靈活性高。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：

A、活化接種：將鏈霉菌活化后，接入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，得到種母液；

B、連續(xù)培養(yǎng)：將種母液依次在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)24-28小時，在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)18-36小時，在150-180轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)18-36小時，得到培養(yǎng)液；

C、發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)液在110-150轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)40-55小時，得到發(fā)酵液；

D、處理發(fā)酵液：將發(fā)酵液經(jīng)過過濾處理后取濾液，得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑。

使用所述生產(chǎn)方法生產(chǎn)得到的葡萄糖異構(gòu)酶，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點。

本發(fā)明使用的培養(yǎng)基為：蔗糖7％、蛋白胨3％、牛肉粉1.5％、麩皮1％、玉米漿0.5％、硫酸銨0.5％、硫酸鎂0.05％、氯化鈷0.05％、磷酸氫二鉀0.02％、磷酸二氫鉀0.01％，余量為純凈水。

優(yōu)選的，培養(yǎng)基為蔗糖10％、蛋白胨1.5％、牛肉粉2.0％、麩皮0.8％、玉米漿1.0％、硫酸銨0.35％、硫酸鎂0.08％、氯化鈷0.05％、磷酸氫二鉀0.02％、磷酸二氫鉀0.01％，余量為純凈水。

為了進(jìn)一步提高得到的液體制劑中的葡萄糖異構(gòu)酶的含量及酶活，優(yōu)選的技術(shù)方案是，所述鏈霉菌為M1033鏈霉菌。所述M1033鏈霉菌是本申請的發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)試驗確定的，相較普通的鏈霉菌，在發(fā)酵后得到的液體制劑中的葡萄糖異構(gòu)酶的含量及酶活耐溫性都較高。

為了進(jìn)一步提高鏈霉菌活化效率，優(yōu)選的技術(shù)方案是，步驟A中，從零下80-零下85℃的凍干管中取出鏈霉菌，在30-35℃下查氏斜面活化48-72小時后，接入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。