[發明專利]高純度液體劑型葡萄糖異構酶的生產方法

有效

• 申請號: 201710121163.9
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106867986B
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 褚偉立;朱國萍;榮東;劉博;蔣棟梁;王鵬;沈小鵬;曹正宇;宋平;扈建斌
• 申請（專利權）人: 安徽新熙盟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/92
• 分類號: C12N9/92;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/465
• 代理公司: 11471 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 王金寶

1.高純度液體劑型葡萄糖異構酶的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、活化接種：將鏈霉菌活化后，接入培養瓶中培養，得到種母液；

B、連續培養：將種母液依次在180-220轉/分，30-35℃下培養24-28小時，在180-220轉/分，30-35℃下培養18-36小時，在150-180轉/分，30-35℃下培養18-36小時，得到培養液；

C、發酵培養：將培養液在110-150轉/分，30-35℃下培養40-55小時，得到發酵液；

D、處理發酵液：將發酵液經過過濾處理后取濾液，得到含有葡萄糖異構酶的液體制劑；

所述鏈霉菌為M1033鏈霉菌；

步驟A中，從零下80-零下85℃的凍干管中取出鏈霉菌，在30-35℃下斜面活化48-72小時后，接入培養瓶中培養；所述培養瓶為搖瓶；步驟B中，將種母液依次在180-220轉/分，30-35℃下在搖瓶中培養24-28小時，然后在180-220轉/分，30-35℃下在一級種子罐中培養18-36小時，在150-180轉/分，30-35℃下在二級種子罐中培養18-36小時，得到培養液；步驟C中，在發酵罐中進行發酵培養；連續培養和發酵培養均在無菌環境中進行；

步驟D中的過濾處理為：向發酵液中添加防腐劑、硅藻土、膨潤土和純凈水，在15-30℃下攪拌15-30分鐘后，靜置1-3小時，再依次進行過濾除渣、微濾除菌和超濾濃縮；所述硅藻土、膨潤土和純凈水相對發酵液的重量百分比分別為1-3％、1-5％和50-150％；板框過濾、微濾和超濾的過濾壓力分別為0.05-0.25MPa，0.15-0.35MPa和0.30-0.50MPa；

步驟D中，超濾濃縮處理后，還有防腐穩定處理：向濃縮液中加入食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷，食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷相對最終液體制劑的體積百分比分別為15-20％，5-10％，2-5％，0.1-0.2％和0.05-0.1％；經過防腐穩定處理后，還需經過檢驗步驟，檢驗合格后，灌裝入庫；檢驗的標準為：含有葡萄糖異構酶的液體制劑的酶活大于等于5000u/ml。