[發(fā)明專利]用于檢測結(jié)直腸癌相關(guān)基因多位點甲基化試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710121118.3
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106893777B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張良祿;董蘭蘭;姚希輝
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢艾米森生命科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.用于檢測結(jié)直腸癌相關(guān)基因多位點甲基化試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括引物組合，引物組合包括第一引物對、第二引物對、第三引物對、第四引物對和第五引物對；所述第一引物對的堿基序列如SEQ ID NO.1-2所示；所述第二引物對的堿基序列如SEQ IDNO.3-4所示；所述第三引物對的堿基序列如SEQ ID NO.5-6所示；所述第四引物對的堿基序列如SEQ ID NO.7-8所示，所述第五引物對為內(nèi)參引物對，所述第五引物對的堿基序列如SEQ ID NO.9-10所示；所述試劑盒還包括探針，所述探針包括第一探針、第二探針、第三探針、第四探針和第五探針；所述第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.11所示；所述第二探針的序列如SEQ ID NO.12所示；所述第三探針的序列如SEQ ID NO.13所示；所述第四探針的序列如SEQ ID NO.14所示；所述第五探針為內(nèi)參探針，所述第五探針的序列如SEQ ID NO.15所示；所述探針的5'端標(biāo)記有熒光基團，所述探針3'端標(biāo)記有淬滅基團，所述熒光基團為FAM、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED中的一種，所述淬滅基團為6-TAMRA、BHQ-1～3、和結(jié)合分子溝的非熒光淬滅劑中的一種。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括樣品保存液、核酸提取液、PCR反應(yīng)液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)對照、標(biāo)準(zhǔn)品試劑。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括溶解緩沖液、甲基化轉(zhuǎn)換試劑、結(jié)合緩沖液、漂洗緩沖液，可將純化后的DNA進行CT轉(zhuǎn)換。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述溶解緩沖液包括1-5mol/L的NaOH和5-20mmol/L的氫琨。

5.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述甲基化轉(zhuǎn)換試劑包括含有亞硫酸基團的鹽，濃度為1-10mol/L。

6.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合緩沖液包括胍鹽，濃度為1-10mol/L。

7.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述漂洗緩沖液包括Tris-HCl濃度為20-100mol/L以及乙醇或異丙醇濃度為50％-80％。

8.權(quán)利要求1所述的試劑盒在制備高通量合管檢測結(jié)直腸癌相關(guān)基因啟動子甲基化區(qū)域產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述結(jié)直腸癌相關(guān)基因為NDRG4、SDC2、TFPI2和BMP3。