[發明專利]一種緣毛鳥足蘭的組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710120517.8
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106718945B
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發明（設計）人: 梁鈞淞;楊業容;韋敏
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟

1.一種緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，依次包括根狀莖中間繁殖體的誘導步驟、增殖步驟及分化培養步驟，其特征在于，所述的根狀莖中間繁殖體的誘導步驟，即將外植體接種到誘導培養基中進行培養，培養溫度為25～28℃，光照強度為1500～2000lx，光照時間為12～16小時/天；

其中，所述的誘導培養基包括：MS、0.5～3.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.1～1.0mg/L萘乙酸、0.05～0.1μmol/L La(NO₃)₃、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L瓊脂、50～100ml/L椰子汁，所述的誘導培養基的pH為5.4～5.8；

其中，所述的增殖培養基包括：MS、1.0～1.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L瓊脂、50～100ml/L椰子汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的增殖培養基的pH為5.4～5.8；

其中，所述的分化培養基包括：MS、0.5～1.5mg/L萘乙酸、0.01～0.05μmol/L La(NO₃)₃、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L瓊脂、0.2～0.5g/L活性炭，所述的分化培養基的pH為5.4～5.8。

2.根據權利要求1所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的增殖步驟為將誘導所得的根狀莖接種到增殖培養基中進行培養，培養溫度為25～28℃，光照強度為1500～2000lx，光照時間為12～16小時/天。

3.根據權利要求1所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的分化培養步驟為將增殖培養所得的根狀莖接種到分化培養基中進行培養，培養溫度為25～28℃，光照強度為1500～2000lx，光照時間為12～16小時/天。

4.根據權利要求3所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，在分化培養步驟之后還包括壯苗培養步驟，即將分化培養所得的小苗接種到壯苗培養基中進行培養；

其中，所述的壯苗培養基包括：1/2MS、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L瓊脂、50～100g/L香蕉汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的壯苗培養基的pH為5.4～5.8。

5.根據權利要求4所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，在壯苗培養步驟之后還包括煉苗和移栽步驟，即將試管苗根部放于自然光下至根系發白，將其放入混合基質中栽培成苗；

所述的混合基質為：體積比為2:2:1的樹皮、蘭石、泥巖。

6.根據權利要求5所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的根狀莖中間繁殖體的誘導步驟的培養時間為60～90天，所述的根狀莖的增殖步驟的培養時間為30～60天，所述的分化培養步驟的培養時間為40～60天，所述的壯苗培養步驟的培養時間為30～45天，所述的煉苗和移栽步驟的煉苗時間為3～5天。

7.根據權利要求1所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的根狀莖中間繁殖體的誘導步驟為：將外植體經清水沖洗、升汞消毒、無菌水漂洗后接種到誘導培養基中培養60～90天即可誘導形成根狀莖中間繁殖體。

8.根據權利要求7所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的消毒方法包括以下步驟：

步驟1：將采取回實驗室的外植體先在自來水沖洗下剝去外面的葉鞘至僅剩三層葉鞘，將包裹有三層葉鞘的營養芽置于超凈工作臺中；

步驟2：于0.1％的升汞溶液中消毒30～60分鐘，無菌水沖洗2～3次后剝去一層葉鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒10～20分鐘，無菌水沖洗3～5次后再剝去一層葉鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒5～10分鐘，無菌水沖洗3～5次后剝去一層葉鞘；

步驟3：立即置于0.1％的升汞溶液中消毒1～3分鐘，無菌水沖洗5～7次后用無菌濾紙吸干外植體表面的水分，迅速將外植體剪切成0.3～0.5cm的芽點并接種至誘導培養基中。

9.根據權利要求1所述的緣毛鳥足蘭的組培快繁方法，其特征在于，所述的根狀莖中間繁殖體的誘導步驟之前還包括外植體采集步驟。