[發(fā)明專利]一種侵染生姜的黃瓜花葉病毒抗血清的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710120098.8 | 申請日： | 2017-03-02 |
| 公開（公告）號： | CN106908611A | 公開（公告）日： | 2017-06-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 韋傳寶 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽威爾試劑盒科技有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | G01N33/96 | 分類號： | G01N33/96;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/531 |
| 代理公司： | 安徽合肥華信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司34112 | 代理人： | 方琦 |
| 地址： | 237000 安徽省六安*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 侵染 生姜 黃瓜花葉病毒 血清 制備 方法 | ||
1.一種制備侵染生姜的黃瓜花葉病毒抗血清的方法，其特征在于，包括以下步驟：
a、粗病毒的提取將黃瓜花葉病毒侵染的生姜病葉勻漿，過濾和低速離心去除大的固體雜質(zhì)，四氯化碳去除葉綠素，加入聚乙二醇6000（PEG6000）、NaCl和Triton-X 100后靜置使病毒粒子沉淀，用20%蔗糖墊進(jìn)一步純化獲得的黃瓜花葉病毒顆粒， 將其溶解于PBS中，得到病毒懸液，于-80°C儲存?zhèn)溆茫?/p>
b、黃瓜花葉病毒外殼蛋白的5-20% SDS-PAGE梯度分離純化將病毒懸液與等體積的1.5-2.5倍SDS上樣緩沖液混合，沸水浴加熱8-12分鐘，冷卻后離心除去沉淀，然后將樣品加入制備型的5-20% SDS-PAGE梯度凝膠板中電泳，完畢后凝膠用4°C的0.25M KCl浸泡染色，切下乳白色的黃瓜花葉病毒外殼蛋白條帶，平分3-5份；
c、將含外殼蛋白的凝膠加生理鹽水磨細(xì)后，免疫注射3-5只小鼠，4次免疫注射，兩次之間間隔6-7天，第一次注射方式為皮下注射0.24-0.26 mL,腹腔注射0.24-0.26 mL，第二、第三和第四次注射均腹腔注射0.48-0.52 mL，第四次注射后第3天斷頭取血，6小時(shí)后離心獲得抗血清。
2.權(quán)利要求1所述的抗血清制備方法制得的抗血清。
3.權(quán)利要求2所述的抗血清在侵染生姜黃瓜花葉病毒檢測上的應(yīng)用。
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