[發明專利]一種山豆根中黃酮類化合物的提取檢測方法

有效

• 申請號: 201710119804.7
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106770839B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 李行諾;鄭麗瓊;顏繼忠
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/08
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

本發明提供了一種山豆根中黃酮類化合物的提取檢測方法，待檢測的黃酮類化合物為lupinifolin和山豆根色滿二氫黃酮C，分別簡稱為黃酮1和黃酮4；本發明創造性地將基質固相分散萃取技術和反向微乳毛細管電動色譜技術結合，采用離線富集和在線富集技術的聯用實現山豆根中黃酮類化合物的二次富集，有利于其定量檢測，且本發明在一個微量體系中實施，所用藥材以及實驗藥品試劑均在微克級別，有害化學試劑使用量少，安全，經濟，環保。

(一)技術領域

本發明公開了一種將分子篩基質固相萃取技術(MSPD)和反向微乳毛細管電動色譜(MEEKC)在線富集技術聯用來提取分離山豆根藥材中黃酮類化合物的分析檢測方法，具體地說，它涉及由分子篩SBA-15作為吸附劑，結合基質固相萃取技術的離線富集和反向微乳場放大進樣(FASI-MEEKC)的在線富集，旨在建立一種針對槐屬植物中富含的具有異戊二烯基側鏈的小極性游離型黃酮類化合物的分離分析方法。

(二)背景技術

山豆根為豆科蔓生性矮小灌木植物越南槐(Sophora tonkinensis Gagnep.)的干燥根及根莖，主產于廣西、貴州。始載于《開寶本草》。藥性苦寒，有毒。歸肺、胃經。功效清熱解毒，消腫利咽。近代臨床常用于治療咽喉腫痛、濕熱黃疸以及心律失常等病癥。研究表明，山豆根富含生物堿、皂苷、黃酮類及多糖等化合物，其中生物堿和黃酮為其主要化學成分。迄今為止，針對山豆根的研究大多集中于生物堿，忽略了山豆根中黃酮類化合物的研究和開發，目前對山豆根中黃酮類成分研究的文獻報道很少，僅有的二十幾篇相關文獻主要針對山豆根中總黃酮的提取和鑒別、化學成分及藥理毒性研究等。因此對山豆根中黃酮類化合物的研究非常有必要。

一方面，山豆根中的黃酮大部分是游離型，且具有異戊二烯基側鏈，極性小，用HPLC分離耗時長，分離效果差。毛細管電泳技術具有多種分離模式，其中的微乳毛細管電動色譜(MEEKC)不僅分離范圍廣，可以同時分離水溶性、脂溶性、帶電或不帶電的物質，而且進樣體積小(nL)、分析時間快、流動相用量少(mL)；另一方面，山豆根中黃酮類化合物化學組分結構比較復雜，種類多樣且每種黃酮含量不高，用常用的HPLC分離方法難以實現完全分離和定量測定，而FASI-MEEKC能同時實現樣品的在線分離和富集，提高其分析靈敏度。并且目前尚無MEEKC法在山豆根中黃酮類化合物中的應用研究，因此本發明具有一定創新性。

針對山豆根的樣品前處理方法，目前主要集中在超聲提取、回流提取等傳統方法上，雖然簡單易行，但提取時間長，提取效率低，大量有機溶劑的使用，不僅對實驗操作人員身體有害，而且對環境污染嚴重。基質固相分散萃取技術(MSPD)是建立在固相萃取基礎上的一種新型樣品處理技術，為近年來國內外研究的一個熱門領域，已經廣泛地應用于水果、蔬菜、果汁等植物樣本的農藥殘留檢測領域。目前文獻報道的基質固相分散萃取技術多采用弗羅里硅土、硅藻土、C₁₈反向硅膠、氧化鋁等作為吸附劑，其藥材量和吸附劑的量以及洗脫劑的用量較大，尤其洗脫劑用量在10mL以上，對環境會造成污染。分子篩作為新型基質固相分散萃取吸附劑，由于它孔徑均勻、高比表面積、大孔體積、高吸附能力、強熱穩定性等優點，使其在中藥活性成分的提取檢測方面有很好的應用前景。本發明以山豆根中黃酮類化合物為示范，將分子篩SBA-15引入山豆根中6種黃酮類化合物的提取中，可簡化提取步驟，提高提取率，且可避免有機溶劑的殘留。

綜上，本發明建立了基于SBA-15的基質固相分散萃取技術結合FASI-MEEKC在線富集技術測定山豆根中黃酮類化合物的含量，以期為山豆根藥材的含量測定和質量控制提供一種更加綠色、簡便、快速、高效的新方法。

(三)發明內容

本發明創造性地將基質固相分散萃取技術和反向微乳毛細管電動色譜技術結合，采用離線富集和在線富集技術的聯用實現山豆根中黃酮類化合物的二次富集，有利于其定量檢測，且本發明在一個微量體系中實施，所用藥材以及實驗藥品試劑均在微克級別，有害化學試劑使用量少，安全，經濟，環保。