[發明專利]用于鑒定鬣羚的特異性PCR引物以及利用特異性PCR引物鑒定鬣羚的方法

有效

• 申請號: 201710119279.9
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106755536B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 晏鵬;李延穎;王美菊;吳孝兵
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 鄒飛艷;張苗

本發明公開了一種特異性PCR引物及利用其鑒定鬣羚(Capricornis sumatraensis)的方法，該所述方法包括：1)提取待測樣品的總DNA；2)采用特異性PCR引物對所述總DNA進行PCR擴增；3)取步驟2)中得到的產物做瓊脂糖凝膠電泳檢測；在步驟3)所得的瓊脂糖凝膠電泳圖中，若泳道中出現1條特定長度的條帶，則判斷所述待測樣品為來自鬣羚的樣品，若泳道中不出現1條條帶，則判斷所述待測樣品不是來自鬣羚的樣品。該方法中的DNA模板可從動物的毛發、殘肢、骨骼、皮張及糞便中提取，大大降低了取樣的難度，且該方法可簡便快捷地鑒定鬣羚，從而達到了簡便易行且經濟實用地鑒定鬣羚的目的。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體地，具體地，涉及一種用于鑒定鬣羚的特異性PCR引物和方法，以及它們在鑒定鬣羚中的應用。

背景技術

鬣羚(Capricornis sumatraensis)是一種廣泛分布于我國東部林地的草食性獸類，也被稱為蘇門羚、明鬃羊，分類地位上屬哺乳綱(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、牛科(Bovidae)。鬣羚為典型林棲獸類，是我國東南部熱帶、亞熱帶地區的典型獸類之一，主要活動于海拔1000m～4400m的針闊混交林、針葉林或多巖石的雜灌林。作為一種大型的林地獸類，鬣羚的皮、肉皆具有極大的經濟價值，因此對其的違法盜獵和貿易一直是影響其種群健康發展的重要影響因素。在物種保護方面，鬣羚被列入國家II級重點保護動物和世界自然保護聯盟(IUCN)瀕危物種紅色名錄(近危級)。國際上，瀕危野生動植物種國際貿易公約(CITES)更將其列入了附錄I物種保護名錄，其國際間的交換和貿易受到嚴格控制。

基于分類學的準確物種鑒定是人類認知自然和可持續發展的必要前提。物種鑒定的結果往往是森林公安、工商、邊檢等行政執法部門開展野生動物資源保護與管理工作的基礎。傳統的形態學分類方法一直是靈長類動物鑒定的常用方法，但形態學分類方法固有的一些缺陷也給物種鑒定工作帶來了困難，比如表型可塑性和遺傳可變性、生物性別和發育階段限制等。尤其是近年來在鬣羚物種的實際鑒定工作中發現，出于對其皮張及肉的價值攫取，往往送檢的鬣羚樣品都是毛發、殘肢、骨骼、皮張及糞便等，均非完整個體且樣品量較小，從形態學上幾乎已無法識別。這反映出在現實工作中，單純基于形態學特征的物種鑒定方法已難以滿足鬣羚保護工作的實際需求。

隨著聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術在法醫學鑒定中的不斷應用，以DNA序列分析為代表的分子生物學技術在瀕危野生動物物種鑒定中也得到了廣泛的應用。本研究的主要目標是基于位點特異性PCR方法實現對鬣羚的物種特異性分子鑒定。本方法通過利用1對鬣羚物種特異性引物，僅需1次PCR擴增，通過對電泳圖譜目的條帶的判讀即可完成樣品的來源鑒定，具有時效性高(﹤3小時)、成本低廉及操作簡便的優點，并可廣泛適用于以糞便樣品為研究對象的種群遺傳學研究領域，極大豐富了鬣羚的保護生物學研究手段，具有較大的推廣價值。

因此，提供一種無需DNA的測序、序列比對等繁瑣步驟，同時對樣品來源無限制，且可僅通過一次PCR擴增即可快速有效地實現對鬣羚物種的精確測定的特異性PCR引物是本發明亟需解決的問題。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的在于克服現有技術中通過形態學特征對鬣羚物種進行測定的局限性，或是以常規方法對毛發、殘肢、骨骼、皮張及糞便中DNA進行測定來確定物種的方法耗時耗力且花費較大的問題，提供一種簡便快捷且經濟的用于鑒定鬣羚的特異性PCR引物和鑒定鬣羚的方法，以及它們在鑒定鬣羚中的應用。

為了實現上述目的，本發明提供了一種用于鑒定鬣羚的特異性PCR引物，其中，所述特異性PCR引物包括如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示的引物對。

本發明還提供了一種利用特異性PCR引物鑒定鬣羚的方法，其中，所述方法包括：

1)提取待測樣品的總DNA；