[發明專利]耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測方法

有效

• 申請號: 201710117626.4
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106702006B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 陳笑蕓;汪小福;徐俊鋒;彭城;徐曉麗;魏巍
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發明公開了耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性PCR檢測方法。本發明首先公開了檢測耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的3對特異性PCR檢測引物對。本發明進一步建立一種耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性PCR檢測方法。特異性、靈敏度及檢出限實驗證明，本發明耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性PCR檢測方法具有高度特異性，靈敏度度高，且檢出限低。本發明還公開了一種耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性PCR檢測試劑盒。本發明耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性PCR檢測方法或試劑盒適用于耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的定性檢測。

技術領域

本發明涉及耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測方法，屬于耐除草劑大豆的定性檢測領域。

背景技術

近年來，隨著基因工程技術的飛速發展，轉基因作物種植面積和轉基因作物品種都大量增加，同時轉基因植物及其產品安全性也引起全球范圍內的關注和擔憂。為了有效監管轉基因植物及其產品，保障消費者的合法權益，目前，包括中國在內的全世界50多個國家頒布并實施了轉基因生物安全標識制度和配套的管理規定。中國的基因工程育種技術發展迅速，近年來育成了一系列的轉基因品種作物，因此制定相關的轉基因生物安全評價方法顯得尤其重要。

在轉基因作物及其產品安全檢測方法中，PCR技術以其靈敏度高、穩定性好、準確性強、操作簡便成為國際上轉基因植物及其產品檢測的主要方法，中國近年來頒布的轉基因生物及其產品安全評價方法也是以PCR檢測方法為主。根據檢測目的基因的不同，PCR檢測方法分為篩查、基因特異性、構建特異性和轉化體特異性檢測；其中，轉化體特異性檢測方法的特異性最高，篩查檢測和轉化體特異性檢測方法是實際檢測中應用最廣泛的方法。篩查檢測方法主要用于初步檢測樣品中是否含有轉基因成分，轉化體特異性檢測方法可以準確確定轉基因植物的身份。

轉基因耐草甘膦大豆SHZD32-1由上海交通大學研發，利用農桿菌介導法將密碼子經優化的耐草甘膦基因G10-EPSPS導入了栽培大豆品種“中豆32”獲得轉G10-EPSPS基因的耐草甘膦大豆SHZD32-1。G10是一個新的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因。溫室試驗和中間試驗表明，轉G10基因耐草甘膦大豆的耐草甘膦性能良好，能夠達到耐除草劑的運用水平，已經獲批進行環境試驗。到目前為止，中國尚未發布專門針對耐草甘膦大豆SHZD32-1及其衍生品種檢測的方法，迫切需要盡快制定相關檢測方法，為中國轉基因生物安全管理部門實施各項安全管理制度提供科學方法和技術支撐。

發明內容

本發明所要解決的第一個技術問題是提供用于檢測耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的特異性PCR檢測引物對；

本發明所要解決的第二個技術問題是建立一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測方法。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：

本發明根據耐除草劑大豆SHZD32-1的RB(5′端)和LB(3′端)兩端側翼序列，在分析兩側翼序列的基礎上，在左邊界設計了8條正向引物和8條反向引物，右邊界設計7條正向引物和8條反向引物，選擇左右邊界擴增片段長度均在150～400bp之間的40對引物用于測試。本發明分別以1％和0.1％兩個濃度的大豆DNA為模板，使用常規體系和擴增條件進行PCR擴增，對上述40對引物進行初步篩選。根據引物的擴增特異性、穩定性及靈敏度，本發明篩選獲得擴增效果較好的3對特異性檢測引物，能夠用于耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測，所述3對特異性PCR檢測引物的序列如下：

引物對1(RB6F/5R)：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列組成；

引物對2(RB5F/5R)：由SEQ ID No.3和SEQ ID No.2所示核苷酸序列組成；