[發(fā)明專利]耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710117626.4
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106702006B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳笑蕓;汪小福;徐俊鋒;彭城;徐曉麗;魏巍
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.用于檢測耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的特異性PCR檢測引物對，其特征在于，所述引物對由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列組成。

2.權(quán)利要求1所述的特異性PCR檢測引物對在檢測耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種中的應(yīng)用。

3.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待檢測大豆樣品的DNA；(2)以提取的DNA為模板，以權(quán)利要求1所述的引物對為擴(kuò)增上下游引物，建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行PCR擴(kuò)增；(3)如果從待檢測樣品中擴(kuò)增出234bp的條帶，則待檢測的大豆樣品是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種；如果從待檢測樣品中未能擴(kuò)增出234bp的條帶，則待檢測的大豆樣品不是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種。

4.按照權(quán)利要求3所述的定性PCR檢測方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增體系包括：反應(yīng)體系總體積為25.0μL，其中，10×PCR緩沖液2.5μL，25mmol/L氯化鎂溶液1.5μL，dNTPs混合溶液2.0μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，終濃度為0.025U/μL的TaqDNA聚合酶，25mg/L DNA模板2μL，余量為雙蒸水。

5.按照權(quán)利要求3所述的定性PCR檢測方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的程序包括：95℃變性5min；95℃變性30s，54-62℃退火45s，72℃延伸45s，共進(jìn)行35次循環(huán)；72℃延伸7min。

6.按照權(quán)利要求5所述的定性PCR檢測方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的程序包括：95℃變性5min；95℃變性30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，共進(jìn)行35次循環(huán)；72℃延伸7min。

7.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的定性PCR檢測試劑盒，包括：10×PCR緩沖液，氯化鎂溶液，dNTPs混合溶液，檢測上下游引物對，Taq DNA聚合酶和雙蒸水；其特征在于，所述檢測上下游引物對為權(quán)利要求1所述特異性PCR檢測引物對。