[發明專利]α2巨球蛋白檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710117035.7
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106996978A
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 劉永暉;張小銳;劉希
• 申請（專利權）人: 北京九強生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司11314
• 代理人: 程偉,韓文華

技術領域

本公開涉及醫學免疫體外診斷領域，具體涉及一種用免疫透射比濁法檢測α2巨球蛋白的試劑盒。

背景技術

α2巨球蛋白(α2-macroglobulin，α2MG或AMG)是血漿中分子量最大的蛋白質。α2巨球蛋白的分子量約為65.2萬-80萬，含糖量約8％，由4個亞單位組成。它與淋巴網狀系統細胞的發育和功能有密切聯系。

α2MG最突出的特性是能與多種分子和離子結合。特別是它能與不少蛋白水解酶結合而影響這些酶的活性，如與肽鏈內切酶(包括絲氨酸、巰基、羧基蛋白水解酶和金屬蛋白水解酶)的結合。這些蛋白水解酶包括纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及組織蛋白酶D等。

研究表明，α2MG與蛋白水解酶相互作用可使α2MG的分子構象發生變化，當酶處于復合物狀態時，酶的活性部位沒有失活，但不容易作用于大分子底物，若底物為分子量小的蛋白質，即使有其它抗蛋白酶的存在，也能被α2MG-蛋白酶復合物所催化而水解。這樣，α2MG起到有選擇地保護某些蛋白酶活性的作用，這在免疫反應中可能具有重要意義。

α2MG是由肝細胞與單核吞噬細胞系統中合成的，半壽期約5天，但當與蛋白水解酶結合成為復合物后其清除率加速。

α2MG的正常成人參考值為：男：1.50-3.50mg/ml，女：1.50-4.70mg/ml。α2MG升高見于肝病如急慢性肝炎、肝硬化等、腎病綜合征、糖尿病以及惡性腫瘤等。α2MG降低見于急性腎小球腎炎、急性胰腺炎、胃潰瘍、肺氣腫、慢性肝炎、類風濕性肝炎、糖尿病、甲狀腺功能亢進癥、彌散性血管內凝血(DIC)、抗纖維蛋白溶解治療、心臟手術、營養不良等。

目前的α2MG檢測方法主要采用酶聯免疫分析法。然而，此種檢測方法的缺陷在于不能夠用于全自動分析、耗時長、需要專門的技術人員和儀器。因此，本領域中仍然需要一種檢測α2巨球蛋白的試劑盒，以克服酶聯免疫分析法的缺點。

發明內容

本公開提供了一種α2巨球蛋白檢測試劑盒，其包含：第一試劑、第二試劑和任選地校準品。

在一些實施方式中，第一試劑包含緩沖液、表面活性劑、電解質、高分子促進劑、穩定劑、防腐劑；第二試劑包含緩沖液、抗人α2巨球蛋白抗體、電解質、防腐劑；校準品包含緩沖液、人α2巨球蛋白、抗氧化劑、防腐劑。

在一些實施方式中，第一試劑、第二試劑和校準品中的緩沖液各自獨立地選自：磷酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液、CAPSO、MOPS、硼酸鹽緩沖液、Hepes緩沖液及其組合。在一些實施方式中，第一試劑、第二試劑和校準品中的緩沖液濃度為10至600mM。

在一些實施方式中，第一試劑、第二試劑和校準品中的緩沖液的類型可以相同也可以不同；優選是相同的。第一試劑、第二試劑和校準品中的緩沖液濃度可以相同也可以不同。

在一些優選實施方式中，第一試劑和第二試劑中的緩沖液類型相同；第一試劑和第二試劑中的緩沖液濃度不同。

在一個具體實施方式中，第一試劑的緩沖液是200mM磷酸鹽緩沖液；第二試劑的緩沖液是50mM磷酸鹽緩沖液。本領域技術人員可以理解，隨著緩沖液類型、濃度的改變，緩沖液的pH值也有所不同。

在一些實施方式中，α2巨球蛋白抗體為多克隆抗體或單克隆抗體，其中多克隆抗體選自：鼠抗人、兔抗人、羊抗人、雞抗人、鴨抗人α2巨球蛋白抗體及其組合。在一些實施方式中，所述抗人α2巨球蛋白抗體濃度為10至500mg/ml，例如10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、200、250、300、350、400、450、500mg/ml以及前述任意兩個數值之間的范圍。在一些具體的實施方式中，所述的抗體的濃度是20mg/ml。

在一些實施方式中，校準品中的所述α2巨球蛋白為自然抗原或人工合成抗原。

在一些實施方式中，所述的表面活性劑選自：Triton、Tween、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚中的一種或更多種。其中，所述聚氧乙烯烷基苯基醚是聚氧乙烯壬基苯基醚或聚氧乙烯辛基苯基醚。在一些實施方式中，所述的表面活性劑濃度為0.5至50g/L，優選0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0、40.0、50.0g/L以及前述任意兩個數值之間的范圍。在一些具體的實施方式中，所述的表面活性劑是吐溫20，優選2.0至10.0g/L。