[發明專利]提取原油總脫氧核糖核酸的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201710116846.5
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106754895B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 萬云洋;穆紅梅;洪寧;顧雪瑩;田燕
• 申請（專利權）人: 中國石油大學(北京)
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

本發明涉及提取原油總脫氧核糖核酸的方法及試劑盒，所述方法包括對原油預處理；陽?陰表活劑法裂解活細胞和/或死細胞得含總脫氧核糖核酸的上清液；利用氯仿?醇沉淀、苯酚/氯仿?醇沉淀、氯仿?純化柱及苯酚/氯仿?純化柱4種純化方法之一提取得到總脫氧核糖核酸。本發明針對原油自身性質和成分復雜的特點，開發了4種適用范圍廣的提取原油中總脫氧核糖核酸的方法和試劑盒，可有效提取原油總脫氧核糖核酸。

技術領域

本發明涉及提取原油總脫氧核糖核酸(DNA)的試劑盒及其方法，屬于微生物地質學技術領域。

背景技術

從油藏環境中高效提取總DNA是應用分子生物學方法研究油藏微生物多樣性的前提和基礎，樣品DNA質量是后續分子生物學實驗成敗的關鍵因素。無論是新開發或開發中的油藏(分別簡稱為新油藏和舊油藏)，采出液樣品包括原油、油水混合物、地層水和固體物質，大多是油水混合物。我國現階段新油藏不多，大多數已經是開發中后期舊油藏，不同驅油作業方式導致采出液產生大量懸浮物，致使樣品很難進行過濾分離。特別是原油屬于復雜體系，由數目眾多的烴類和非烴類化合物組成(a.杜衛東，萬云洋，鐘寧寧等.土壤和沉積物石油污染現狀[J].武漢大學學報(理學版).2011(04):311-322；b.Du W,Wan Y,Zhong N,et al.Status quo of soil petroleum contamination and evolution ofbioremediation[J].Petroleum Science.2011,8(4):502-514.)，不能在水中充分擴散，導致原油中的微生物不能與水充分混合，長期以來無人關注，甚至認為微生物不可能存在于原油中，并且不同類型的原油密度差異大，這些特點都給DNA高效提取帶來相當大的難度。目前，對于新舊油藏原油樣品總DNA的提取，國內外還未形成一套通用的提取純化方法體系，因此，本領域亟需構建一套在油藏領域通用的純化體系。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供提取原油總脫氧核糖核酸的方法和試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供提取原油總脫氧核糖核酸的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)對原油預處理；

(2)采用陽-陰表活劑法裂解經預處理后的原油中活細胞和/或死細胞得含總脫氧核糖核酸的上清液；

(3)利用氯仿-醇沉淀、苯酚/氯仿-醇沉淀、氯仿-純化柱及苯酚/氯仿-純化柱4種純化方法之一從所述上清液中提取得到總脫氧核糖核酸。

本發明還可根據上述方法開發出4種提取原油總脫氧核糖核酸的試劑盒。

本發明針對原油自身性質和成分復雜的特點，開發了一種適用范圍廣的提取原油中總DNA的方法和試劑盒，其通過陽-陰表活劑法可減少DNA損失，利用4種純化方式中任一種可增加朊和鹽類等的去除，既提高了提取液中DNA的濃度又提高了純度。

根據本發明的具體實施方案，在本發明所述的方法中，所述的對原油預處理包括以異辛烷和/或乙二胺四乙酸(TE)緩沖液對原油進行預處理。

根據本發明的具體實施方案，在本發明所述的方法中，所述的預處理包括在原油中加入等體積異辛烷和/TE緩沖液，再加入適量玻璃珠，渦旋，充分研磨成勻漿，裝入離心管后離心，棄去上清液，保留離心管底部的沉淀，并放入冰箱內備用。