[發(fā)明專利]一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法

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• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106701642A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設計）人: 余萍;張春宇;閔祥博
• 申請（專利權）人: 漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A23L33/135;C12R1/23
• 代理公司: 沈陽杰克知識產(chǎn)權代理有限公司21207
• 代理人: 胡洋

技術領域

本發(fā)明屬于食品生物技術領域，具體涉及一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法。

背景技術

在人的腸道中存在著幾百種、數(shù)百億個細菌，在腸內構成菌叢。迄今為止，人們已知這些腸道細菌分三類：一類是能夠合成某些維生素、對有害細菌的增殖有抑制作用、對免疫功能有刺激和促進的效果，這就是以雙歧桿菌和乳桿菌為主的有益菌，這些細菌通過調整腸道生態(tài)系統(tǒng)可保持人體的健康，減少疾病，延緩衰老，因此被稱為益生菌；另一類是在腸道內會構成腐敗、產(chǎn)生有害或致癌物質的有害菌，如梭狀芽胞桿菌、擬桿菌屬和真細菌屬等；另外還有一類既有有害作用，又有有益作用的細菌，如胨球菌。

嗜酸乳桿菌屬乳桿菌科中的乳桿菌屬，形態(tài)呈細長桿狀，桿的末端呈圓形，細胞大小一般0.6～0.9×1.5～6.0μm，成單、成雙或者2～3個呈短鏈排列，無鞭毛，不運動，革蘭氏陽性厭氧或兼性厭氧無芽孢桿菌，天然地存在于人和動物的胃腸道、人的口腔、陰道及傳統(tǒng)的發(fā)酵乳中。

嗜酸乳桿菌在人體整個胃腸道中，調節(jié)微生態(tài)環(huán)境，抑制腸道不良微生物的增殖，對致病微生物具有拮抗作用。在胃部它是個小型“消毒車間”，在大腸中，它也可以釋放有益雙歧桿菌等其他益生菌生長的物質，增加大腸內益生菌的數(shù)量、增強它們的生命力。嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌在腸道內數(shù)量龐大，相互扶助，通過維護整個胃腸道的微生態(tài)平衡，還可產(chǎn)生乳酸和醋酸，能提高鈣、磷、鐵的利用率，促進鐵和維生素D的吸收，產(chǎn)生維生素K及維生素B，還可以減少膽固醇的吸收，并能降低輻射對人體的傷害。

基于嗜酸乳桿菌對人體具有很好的營養(yǎng)保健作用，越來越多的企業(yè)以嗜酸乳桿菌凍干粉為食品添加劑制備生物制品和健康食品，那么單位產(chǎn)品活菌數(shù)就直接影響產(chǎn)品的功效。因此，在凍干粉生產(chǎn)制備過程中提高活菌數(shù)就尤為重要。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法，達到嗜酸乳桿菌增殖培養(yǎng)、凍干粉活菌數(shù)量大、菌體收率高的目的。

本發(fā)明采用的技術方案為：

一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法，包括如下步驟：

1)菌種劃線培養(yǎng)：嗜酸乳桿菌菌粉用無菌水稀釋后，于MC培養(yǎng)基上分區(qū)劃線，劃線結束后，平皿倒置，35℃培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)40～72小時；

2)一級純化培養(yǎng)：挑取平皿上溶鈣圈較大的單菌落接種至裝有MRS液體培養(yǎng)基的試管中，試管密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)30～50小時；

3)二級純化培養(yǎng)：按3～5％接種量，將培養(yǎng)好的一級菌懸液接種至裝有MRS液體培養(yǎng)基的三角瓶中，培養(yǎng)基裝液體積占三角瓶容積的40％～60％，三角瓶密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)30～50小時；

4)菌種保存：將二級純化培養(yǎng)得到的菌懸液進行離心，12000rpm離心10分鐘后得到菌泥，將菌泥溶解于MRS液體培養(yǎng)基與50％甘油溶液的混合溶液中，得菌泥混合液，再將菌泥混合液分裝在已滅菌的凍存管中，得嗜酸乳桿菌菌泥凍存管，封口膜密封，凍存于-40～-80℃低溫冰箱內，備用；

5)凍存菌種復蘇：取存于低溫冰箱內嗜酸乳桿菌菌泥凍存管，立即放入35℃水浴鍋內進行菌種復蘇，30～45s，至凍存管內液體全部融化；

6)菌種一級培養(yǎng)：將復蘇好的菌泥混合液1～2ml直接接種至裝有基礎培養(yǎng)基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)15～20小時；

7)菌種二級培養(yǎng)：按照2～6％接種量，將一級培養(yǎng)結束的菌懸液接種至裝有基礎培養(yǎng)基的三角瓶中，基礎培養(yǎng)基裝液體積占三角瓶容積的40％～60％，三角瓶密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)15～20小時；

8)菌種三級培養(yǎng)：按照2～6％接種量，將二級培養(yǎng)結束的菌懸液接種至裝有優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，優(yōu)化培養(yǎng)基裝液體積占發(fā)酵罐容積的40％～60％，開啟發(fā)酵罐攪拌槳，轉速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養(yǎng)7～12小時；

9)菌種四級發(fā)酵：按照2～8％接種量，將三級培養(yǎng)結束的菌懸液接種至裝有優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，優(yōu)化培養(yǎng)基裝液體積占發(fā)酵罐容積的60％～80％，開啟發(fā)酵罐攪拌槳，轉速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養(yǎng)，在發(fā)酵開始4小時后，通過流加食品級NaOH溶液來維持菌液的恒pH為5.0±0.1，培養(yǎng)周期9～12小時，直至監(jiān)測到菌液OD₆₀₀值停止增長或呈負增長，立即停止發(fā)酵；

10)發(fā)酵液離心：四級發(fā)酵結束后，將發(fā)酵罐罐體溫度調低，當罐內發(fā)酵液溫度低于20℃時方可準備離心，離心設備采用管式離心機，離心前對轉鼓進行蒸汽滅菌30min，離心轉速為10000～15000rpm，離心結束后，收集轉鼓內的菌泥；