[發明專利]一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法在審
| 申請號: | 201710116433.7 | 申請日: | 2017-03-01 |
| 公開(公告)號: | CN106701642A | 公開(公告)日: | 2017-05-24 |
| 發明(設計)人: | 余萍;張春宇;閔祥博 | 申請(專利權)人: | 漢臣氏(沈陽)兒童制品有限公司 |
| 主分類號: | C12N1/20 | 分類號: | C12N1/20;C12N1/04;A23L33/135;C12R1/23 |
| 代理公司: | 沈陽杰克知識產權代理有限公司21207 | 代理人: | 胡洋 |
| 地址: | 110326 遼寧*** | 國省代碼: | 遼寧;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 酸乳 桿菌 干粉 制備 方法 | ||
1.一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
1)菌種劃線培養:嗜酸乳桿菌菌粉用無菌水稀釋后,于MC培養基上分區劃線,劃線結束后,平皿倒置,35℃培養箱恒溫培養40~72小時;
2)一級純化培養:挑取平皿上溶鈣圈較大的單菌落接種至裝有MRS液體培養基的試管中,試管密封,35℃培養箱恒溫靜置培養30~50小時;
3)二級純化培養:按3~5%接種量,將培養好的一級菌懸液接種至裝有MRS液體培養基的三角瓶中,培養基裝液體積占三角瓶容積的40%~60%,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養30~50小時;
4)菌種保存:將二級純化培養得到的菌懸液進行離心,12000rpm離心10分鐘后得到菌泥,將菌泥溶解于MRS液體培養基與50%甘油溶液的混合溶液中,得菌泥混合液,再將菌泥混合液分裝在已滅菌的凍存管中,得嗜酸乳桿菌菌泥凍存管,封口膜密封,凍存于-40~-80℃低溫冰箱內,備用;
5)凍存菌種復蘇:取存于低溫冰箱內嗜酸乳桿菌菌泥凍存管,立即放入35℃水浴鍋內進行菌種復蘇,30~45s,至凍存管內液體全部融化;
6)菌種一級培養:將復蘇好的菌泥混合液1~2ml直接接種至裝有基礎培養基的三角瓶中,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養15~20小時;
7)菌種二級培養:按照2~6%接種量,將一級培養結束的菌懸液接種至裝有基礎培養基的三角瓶中,基礎培養基裝液體積占三角瓶容積的40%~60%,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養15~20小時;
8)菌種三級培養:按照2~6%接種量,將二級培養結束的菌懸液接種至裝有優化培養基的發酵罐中,優化培養基裝液體積占發酵罐容積的40%~60%,開啟發酵罐攪拌槳,轉速為100rpm,通氣量為0,35℃恒溫培養7~12小時;
9)菌種四級發酵:按照2~8%接種量,將三級培養結束的菌懸液接種至裝有優化培養基的發酵罐中,優化培養基裝液體積占發酵罐容積的60%~80%,開啟發酵罐攪拌槳,轉速為100rpm,通氣量為0,35℃恒溫培養,在發酵開始4小時后,通過流加食品級NaOH溶液來維持菌液的恒pH為5.0±0.1,培養周期9~12小時,直至監測到菌液OD600值停止增長或呈負增長,立即停止發酵;
10)發酵液離心:四級發酵結束后,將發酵罐罐體溫度調低,當罐內發酵液溫度低于20℃時方可準備離心,離心設備采用管式離心機,離心前對轉鼓進行蒸汽滅菌30min,離心轉速為10000~15000rpm,離心結束后,收集轉鼓內的菌泥;
11)凍干保護劑添加:菌泥收集完畢后,按照菌泥:凍干保護劑=1:1~2的體積比,添加凍干保護劑,并攪拌、混合均勻,分裝到凍干機托盤;
12)冷凍干燥:將凍干機托盤放入凍干機內進行菌粉的凍干,真空度0~1.0Pa,溫度-25℃,持續凍干53~72小時;
13)凍干粉收集,粉碎、包裝。
2.如權利要求1所述的一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法,其特征在于,步驟4)中MRS液體培養基與50%甘油溶液的混合溶液中MRS液體培養基與50%甘油溶液的體積比為1:1~1.5。
3.如權利要求1所述的一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法,其特征在于,步驟4)中混合溶液與離心前菌懸液的體積比為1:10。
4.如權利要求1所述的一種嗜酸乳桿菌凍干粉的制備方法,其特征在于,所述基礎培養基的制備方法為:酵母蛋白胨20.0~40.0g/L、葡萄糖15.0~25.0g/L、酵母浸出物5.0~8.0g/L、乙酸鈉4.0~8.0g/L、硫酸鎂0.1~0.3g/L、吐溫80 0.5~0.75g/L、磷酸二氫鉀1.5~3.0g/L、檸檬酸1.5~3.0g/L、余量為無菌水,pH值5.60~6.20;按照配方比例稱量、加熱溶解,用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至5.60~6.20,115℃下滅菌30min。
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