[發明專利]一種固定化雙酶耦合反應生產非天然氨基酸產品的工藝

有效

• 申請號: 201710114172.5
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106636294B
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 馬士忠;馬士強;馬道功;劉冰冰;楊召鵬;冀鵬飛;潘艷軍;張龍海;王海洋
• 申請（專利權）人: 濱海瀚鴻生化有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P39/00;C12P13/04;C12P13/00;C12N11/10;C12N11/082;C12N11/04
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1.一種固定化雙酶耦合反應生產非天然氨基酸產品的工藝，其特征在于：在固定化材料和交聯劑存在下，將具有氨基酰化酶和酰化消旋酶的兩種基因工程菌混合后共固定化得到固定化細胞，以乙酰化-DL-氨基酸為原料，生物催化反應后得到非天然氨基酸產品；所述固定化材料為聚乙烯醇、海藻酸鈉和卡拉膠的混合物，其中聚乙烯醇濃度為10%；重量配比為，聚乙烯醇：海藻酸鈉：卡拉膠= 100: 0.2: 0.5；所述交聯劑為硼酸-硼砂-氯化鈣-碳酸鈉體系，濃度配比為，硼酸15g/L，硼砂15g/L，氯化鈣10g/L和碳酸鈉50g/L；所述共固定化操作為，將聚乙烯醇加入水溶脹24h，然后加入海藻酸鈉和卡拉膠，加熱使其充分溶化，趁熱攪拌，降溫到40～50℃，然后向上述液體中加入預先保溫50℃的氨基酰化酶和酰化消旋酶混合菌懸液，攪拌均勻，然后以滴加的方式滴到交聯劑溶液中，形成小球，在交聯劑中浸泡3～12h；用生理鹽水洗滌，得到氨基酸固定化細胞。

2.根據權利要求1所述固定化雙酶耦合反應生產非天然氨基酸產品的工藝，其特征在于：所述固定化細胞為顆粒狀。

3.根據權利要求1所述固定化雙酶耦合反應生產非天然氨基酸產品的工藝，其特征在于：所述生物催化反應操作為，在水中加入乙酰化-DL-氨基酸，配成0.1-0.5M溶液，用片堿調整pH=7.5，加入上述D-型或L-型氨基酸固定化細胞轉化，37℃，5-10小時后測定，乙酰化-DL-氨基酸小于0.001%，超過99.9%以上轉化為D-型或L-丙氨酸，經過濃縮以及純化處理，得到D-型或L-氨基酸。