[發(fā)明專利]一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710112956.4 | 申請日： | 2017-02-28 |
| 公開（公告）號： | CN106872714A | 公開（公告）日： | 2017-06-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 杜海寧;李鋒;王洪巖;鄭亮德;舒文杰;洪斌;李俊峰 | 申請（專利權(quán)）人： | 阿卡斯特（武漢）生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N30/02 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31253 | 代理人： | 馮子玲 |
| 地址： | 430075 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 通量 大規(guī)模 篩選 組蛋白 修飾 結(jié)合 蛋白質(zhì) 方法 | ||
1.一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于包括以下步驟(1)將組蛋白修飾多肽固定在載體上，制備組蛋白修飾芯片；(2)待篩選蛋白質(zhì)混合物與組蛋白修飾芯片上固定的多肽發(fā)生反應(yīng)；(3)通過提取組蛋白修飾與蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合物，并采用LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用方式鑒定能與已知組蛋白修飾結(jié)合的蛋白質(zhì)種類。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于組蛋白質(zhì)修飾芯片是將制備好的組蛋白修飾多肽固定在任意大小的孔板、尼龍膜、硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、玻璃板或硅板中任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于組蛋白修飾芯片上固定有包含溶膠-凝膠材料與組蛋白修飾多肽混合物的位點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于使用任意數(shù)量位點(diǎn)的組蛋白修飾芯片并結(jié)合LS-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用的方式以達(dá)到高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合的蛋白質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述的組蛋白修飾多肽底物包括H1、H2A、H2B、H3、H4組蛋白在相關(guān)酶作用下的各個反應(yīng)位點(diǎn)發(fā)生的甲基化、乙酰化、磷酸化、腺苷酸化、泛素化、ADP核糖基化修飾。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高通量大規(guī)模篩選組蛋白修飾結(jié)合蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述的組蛋白修飾蛋白質(zhì)芯片上的溶膠-凝膠材料物質(zhì)包含13.5～21重量份的TMOS、8～17重量份的MTMS和3～13.5重量份的GPTMOS。
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