[發(fā)明專利]一種檢測(cè)MiRNA的生物傳感器及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710112746.5
• 申請(qǐng)日: 2017-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN106770143B
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李慧;徐成功;王玉;張雪;劉素;冷雪琪;裴倩倩;崔雪君;韓聰;劉學(xué)嬌;秦藝菲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張世靜

本發(fā)明涉及生物傳感器技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及檢測(cè)檢測(cè)MiRNA的生物傳感器。本發(fā)明采用將銀簇?zé)晒庠鰪?qiáng)與鏈置換循環(huán)放大相結(jié)合，均相反應(yīng)混合液的方法進(jìn)行制備。具體制備方法：使用發(fā)夾2合成銀簇；在均相溶液中進(jìn)行目標(biāo)物MiRNA與模板鏈Template的結(jié)合進(jìn)而產(chǎn)生Trigger的鏈置換以及后續(xù)發(fā)夾1的打開和發(fā)夾2的打開，發(fā)夾1增強(qiáng)發(fā)夾2的銀簇?zé)晒?。利用了目?biāo)物與模板鏈Template的結(jié)合產(chǎn)生Trigger以及后續(xù)Trigger的循環(huán)放大對(duì)目標(biāo)物MiRNA的高特異性檢測(cè)；利用鏈置換，實(shí)現(xiàn)了Trigger的循環(huán)利用，起到了信號(hào)放大的作用。解決了現(xiàn)有技術(shù)中的方法特異性和靈敏度都比較低、成本高的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物傳感器技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及基于富含G的序列能使銀簇?zé)晒庠鰪?qiáng)來(lái)檢測(cè)miRNA的生物傳感器，還涉及銀簇制備方法。

背景技術(shù)

MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其大小長(zhǎng)約20~25個(gè)核苷酸。越來(lái)越多的證據(jù)顯示，miRNA表達(dá)與多種癌癥相關(guān)，大約50%得到注解的miRNAs在基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點(diǎn)（fragile site），miRNA的表達(dá)量水平變化包括兩種，上調(diào)和下調(diào)，與相關(guān)癌癥的類型和階段相關(guān)。上調(diào)的 miRNA通過抑制抑癌基因致使癌變，被認(rèn)為是致癌的miRNA；而下調(diào)的miRNA，通常防止癌癥的發(fā)展，通過抑制原癌基因的表達(dá)量，已知為腫瘤抑癌miRNA。因此，miRNA 已成為用于癌癥的預(yù)后、診斷和治療的生物標(biāo)志物。miR-122是科學(xué)家較早發(fā)現(xiàn)且研究全面的一種miRNA。miRNA-122在肝臟中高度表達(dá)，miRNA-122水平的降低和肝癌細(xì)胞有關(guān)，且在調(diào)節(jié)丙型肝炎病毒的復(fù)制方面也有重要的作用。

目前報(bào)道的MiRNA的檢測(cè)方法主要有定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT—PCR）和Northern blotting 法、克隆測(cè)序法等，但PCR對(duì)溫度和儀器要求較高，Northern blotting法耗時(shí)、過程復(fù)雜、低靈敏性，克隆測(cè)序法也是耗時(shí)耗力。因此，目前急需建立一種快速，準(zhǔn)確，靈敏且高特異性的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)miRNA-122。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)miRNA-122的方法中特異性和靈敏度都比較低、成本高、檢測(cè)周期長(zhǎng)的問題，本發(fā)明提供了一種特異性和靈敏度高、成本低、檢測(cè)速度快的基于鏈置換的富含G的序列能使銀簇?zé)晒庠鰪?qiáng)的生物傳感器以及涉及銀簇制備方法。

本發(fā)明還提供了基于鏈置換的富含G的序列使銀簇?zé)晒庠鰪?qiáng)的生物傳感器的制備方法。

本發(fā)明是通過以下步驟得到的：

本發(fā)明中一共用到了4條DNA鏈，其序列分別是：

MiRNA-122

5’-UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG-3’（SEQ ID NO:1）；

模板DNA鏈Template

5’-CCT TCT CGT CGC ACT GTC GCA CTC AG C TCT GAT C CA AAC ACC ATT GTCACA CTC CA CTCTGATC CAAACACCATTGTCACACTCCA --3’ （SEQ ID NO:2）；

發(fā)夾1： 5’—TGG GGT GGG TGG GTG GGG TTT TTT GCG ACA GTG CAC ATT CATATT TCA CCC TTC TCG TCG CAC TGT CGC ACT CAG--3’ （SEQ ID NO:3）；

發(fā)夾2：