[發(fā)明專利]一種檢測(cè)MiRNA的生物傳感器及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710112746.5
• 申請(qǐng)日: 2017-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN106770143B
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李慧;徐成功;王玉;張雪;劉素;冷雪琪;裴倩倩;崔雪君;韓聰;劉學(xué)嬌;秦藝菲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張世靜

1.一種檢測(cè)MiRNA的生物傳感器的制備方法，其特征在于，由以下步驟制備而成：

（1）使用發(fā)夾2制備銀納米簇AgNCs；

（2）體系在均相反應(yīng)溶液中混合反應(yīng)；

所述發(fā)夾2的序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的銀納米簇AgNCs的制備操作步驟如下：

1）配置濃度為20mM PB緩沖溶液；

2）配制1mL濃度為2mM 的AgNO₃；

3）取1ml的離心管，加入20mM 76μl的PB，加入15μl 100μM發(fā)夾2，加入4.5μl的2mMAgNO_3，震蕩1min，放于4℃冰箱15-30min；

4）在步驟3）反應(yīng)期間用0℃冰水配制NaBH₄溶液，其濃度為2mM，體積為1mL；

5）從冰箱中取出步驟3）溶液后，加入2mM 4.5μl NaBH₄，震蕩1min，放在4℃冰箱4h以上；

6）取30ul制備好的AgNCs于離心管中，加入120ul超純水混勻，用移液槍取150ul溶液于微量比色皿中，使用熒光分析儀對(duì)其進(jìn)行掃描，使用激發(fā)光560nm，測(cè)得其發(fā)射峰在650nm，證明成功合成AgNCs；

所述的均相溶液中反應(yīng)過程的主要步驟如下：

反應(yīng)分為A、B兩個(gè)體系，

A體系包含

2μL的MiRNA；

2μL 10nM模板鏈Template；

2μL10×phi29的buffer；

2μL1000mM氯化鉀；

12μL的DEPC水；

共20μL；

B體系包含

2μL 40U/μL的RNA酶抑制劑；

1μL 250μM的dNTPs；

1μL Nt.AlWI；

2μL 0.4U/μL的phi29；

將2μL 15μM的發(fā)夾1加入到B體系中，之后再加入2μL 15μM已合成好銀簇的發(fā)夾2，使得B體系共10μL；將A體系在90℃條件下溫育10min,然后從90℃逐漸冷卻至37℃；其后，將A部分和B部分混合，在37℃水浴下溫育1h；A和B體系共30μL，然后補(bǔ)加120μL的水混勻后，使用熒光儀檢測(cè)熒光；

所述MiRNA序列如SEQ ID NO:1所示；

所述Template序列如SEQ ID NO:2所示；

所述發(fā)夾1序列如SEQ ID NO:3所示。