[發明專利]一種血液細胞穩定劑及其應用

在審

• 申請號: 201710112277.7
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106872338A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 蔣世強;周燕玲;范獻軍
• 申請（專利權）人: 珠海麗珠圣美醫療診斷技術有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N33/49;G01N1/30
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司44202
• 代理人: 溫旭

技術領域

本發明涉及細胞保護劑技術領域，具體涉及一種能夠保持血液成份形態、血液中細胞的表面抗原特性、細胞核的完整性和核酸穩定性的血液細胞穩定劑及其應用。

背景技術

全血樣品采集時由于外周環境的溫度、pH和氧氣質量百分數發生了變化，血液離開人體后血小板會釋放促凝因子，引起血液凝固，同時血液細胞也會由于環境的變化而喪失細胞的緊密度，從而死亡。這個過程中，血漿的各組分和血液中細胞成分的物理化學特性和生物標志物(包括蛋白、核酸、小分子等)也會發生改變，從而影響血液樣本中具有診斷意義的檢測結果。因此，穩定血液樣品對于血樣品的運輸和臨床試驗流程的操作極為重要，必須對血液進行恰當的保存固定使得血液細胞呈現最好的狀態。

保存血液的經典方法是全血樣品采集時加入普通抗血液抗凝試劑后，6小時內(最多不超過12小時)需對血液進行分析或者其他處理。目前常見的抗凝試劑有EDTA，EDTA的主要用于螯合鈣離子，阻止了許多的酶促反應而直接或者間接地防止了血液凝固。但是像EDTA這種常規的血液抗凝劑，對血液中的細胞沒有保護作用：在加了抗凝劑的血液中細胞仍然會隨著時間的推移而發生衰亡，不能保持血液細胞表面抗原的狀態。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種血液細胞穩定劑及其應用，該血液細胞穩定劑使得血液中的血液成份和細胞能夠保存192小時以上，并且無需低溫處理，經處理的血液樣品不會影響樣品的后續分子檢測，可廣泛應用于血液樣品中細胞成分的的免疫分析、核酸分析或蛋白質分析的相關實驗。

為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種血液細胞穩定劑，其包括A液和B液，A液為用于維持細胞物理性質的保存液，B液為用于固定細胞的固定液；其中，A液包括以下質量百分數的組分：抗凝劑1～10％、磷酸酶抑制劑1～10％、蛋白酶抑制劑0.005～1％、水余量；B液包括以下質量百分數的組分：醛類聚合物0.1～5％、堿性鹽0.1～5％、鹽酸0.1～5％、水余量。

作為本發明優選的實施方式，所述血液細胞穩定劑的滲透壓為320～400mOsm/kg、pH值為4.5～8。

優選地，所述抗凝劑選自EDTA、檸檬酸鹽、氟化鉀、肝素鈉中的一種或任意兩種以上的混合。

優選地，所述磷酸酶抑制劑選自氟化鈉、原礬酸鈉、甘油磷酸鈉、焦磷酸鈉、四咪唑鹽酸鹽中的一種或任意兩種以上的混合。

優選地，所述蛋白酶抑制劑選自4-(2-氨乙基)苯磺酰氟、苯甲基磺酰氟、亮肽素、抑肽酶、胃蛋白酶抑制劑、EDTA-Na₂中的一種或任意兩種以上的混合。

優選地，所述醛類化合物選自甲醛聚合物、乙醛聚合物或丙醛聚合物。

優選地，所述堿性鹽選自氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。

本發明還提供了上述血液細胞穩定劑在穩定血液細胞中的應用。

具體地，所述血液細胞穩定劑在使用前先將A液和B液混合15～120min，然后加入新鮮的血液中對血液細胞固定1～192h。

優選地，A液和B液按照0.5～2：0.5～2的比例混合。

相比現有技術，本發明的有益效果在于：

本發明所述的血液細胞穩定劑具有保護組織細胞、對蛋白質、酶等緩慢固定的化學物質，能夠穩定血液細胞、保持血液細胞原有的形態、維持血液細胞原有的物理性質，能夠很好地固定血液中的細胞，該血液細胞穩定劑使得血液中的血液成份和細胞能夠保存192小時以上，并且無需低溫處理，經處理的血液樣品不會影響后續的樣品分子分析，可廣泛應用于血液樣品中細胞成分的的免疫分析、核酸分析或蛋白質分析的相關實驗。

附圖說明

圖1為本發明血液溶血實驗中對照組于1h，24h，96h，192h的觀察圖；

圖2為本發明血液溶血實驗中實驗組于1h，24h，96h，192h的觀察圖；

圖3為本發明細胞完整實驗中實驗組MCF-7循環腫瘤細胞的FITC綠色熒光染色圖；

圖4為本發明細胞完整實驗中實驗組單組MCF-7循環腫瘤細胞的FITC綠色熒光染色圖；

圖5為本發明細胞完整實驗中實驗組MCF-7循環腫瘤細胞的細胞核DAPI染色圖；

圖6為本發明細胞完整實驗中實驗組白細胞的細胞核DAPI染色圖；

圖7為本發明細胞完整實驗中實驗組單個白細胞的細胞核DAPI染色圖。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細說明。