[發明專利]一種抗Cas9蛋白的單克隆抗體的制備及應用

在審

• 申請號: 201710110956.0
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN108503709A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 馬曉飛;郭亞璐;武鵬程;陳浩;耿廣薈;康昊翔;尹長城;劉國振;吳琳;劉斯奇
• 申請（專利權）人: 北京華大蛋白質研發中心有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種可特異性識別CRISPR/Cas9基因編輯體系中Cas9蛋白的單克隆抗體的制備方法，目的是提供一種將該抗體用于CRISPR/Cas9基因編輯體系中的外源Cas9蛋白的檢測方法。Cas9蛋白是一種核酸內切酶，在CRISPR/Cas9基因編輯體系中與靶位點序列結合，并對靶位點的DNA進行剪切。制備該抗體的抗原為一段優選的、由大腸桿菌表達、具有免疫原性活性的重組蛋白，最終獲得的抗體屬于IgG1亞型，編碼其可變區的序列經基因克隆的方式獲得，該抗體可用于CRISPR/Cas9基因編輯體系的功能性確認，檢測經CRISPR/Cas9體系的遺傳改良物種(Genetic modified Organisms)。

技術領域

本發明涉及一種可以識別細菌Cas9蛋白質分子的單克隆抗體及可分泌該抗體的雜交瘤細胞系。具體而言，本發明提供了一種基因編輯系統中蛋白的單克隆抗體，對該抗體重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列和編碼可變區的DNA序列進行了確定，該抗體可以用于通過人工或自動化方式，以免疫印跡(Western Blot)、酶聯免疫吸附(ELISA)、免疫組織化學(IHC)、流式細胞術(FACS)方式檢測使用CRISPR/Cas9系統基因編輯的植物(水稻、玉米、小麥、擬南芥、煙草)，動物，人，細胞，微生物，屬于生物檢測領域。

背景技術

Cas9蛋白在CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short repeats/CRISPR-associated 9)系統中具有核酸內切酶功能，全長約1400個氨基酸。CRISPR/Cas系統是基因編輯領域最受歡迎的方法，成為新的研究熱點，根據Cas蛋白組分，可以將CRISPR/Cas系統分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型等3種不同類型。由RNA介導的CRISPR/Cas9系統屬于Ⅱ型，與ZFN(zinc finger nuclease)和TALEN(transcription activator-like effectornuclease)相比，具有可操作性強，可控性好，構建系統成本低且簡單、同時能對多個位點進行基因編輯的優勢。經過改造的CRISPR/Cas9系統被迅速地應用于植物領域，動物領域以及微生物領域。