[發(fā)明專利]一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710110720.7
• 申請(qǐng)日: 2017-02-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107014761A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮嘉倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 梧州市雅正農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙)44295
• 代理人: 龔元元

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品分析領(lǐng)域，尤其是一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

六堡茶屬于黑茶類，主產(chǎn)于廣西梧州六堡鎮(zhèn)，該品種茶葉具有紅、濃、陳、醇的特點(diǎn)，具有消暑祛濕、明目清心、幫助消化的功效，因?yàn)榱げ杷痉纸饨退馗哂谄渌桀悾虼司哂薪∥葛B(yǎng)神、減肥健身的功效，是一種廣受歡迎的茶類。

現(xiàn)代研究表明茶葉降脂、減肥、降糖等保健功能是多種成分綜合作用的結(jié)果，其中起主要作用的有兩大類物質(zhì)，一類是多酚類化合物(簡(jiǎn)稱茶多酚)，另一類是脂多糖類化合物(簡(jiǎn)稱茶多糖)。

研究表明，茶多糖抑制高脂飲食小鼠血脂升高的作用大于茶多酚；茶多糖還有顯著的降低血糖保健功能。倪德江等研究表明不同茶類多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)型糖尿病小鼠均有極顯著的降低血糖作用。在低、中劑量下，烏龍茶、紅茶、黑茶、白茶中茶多糖降低血糖的作用明顯優(yōu)于綠茶茶多糖。日本學(xué)者清水岑夫也揭示了茶葉中降血糖的有效成分是水溶性的組分復(fù)合多糖，即茶多糖。

由于六堡茶中茶多糖具有良好的保健功效，因此準(zhǔn)確測(cè)定茶多糖含量對(duì)選擇原料和評(píng)價(jià)提取、純化工藝非常重要，但卻一直困擾著茶多糖的測(cè)定。

目前，國(guó)內(nèi)外快速測(cè)定多糖含量主要是用蒽酮-硫酸法或苯酚-硫酸法。由于六堡茶中含有大量茶紅素、茶褐素、茶黃素等色素物質(zhì)，對(duì)茶多糖檢測(cè)中的顯色反應(yīng)會(huì)造成很大干擾，造成檢測(cè)結(jié)果偏高，無(wú)法準(zhǔn)確得到茶多糖含量。因此，為準(zhǔn)確測(cè)定六堡茶提取物中茶多糖的含量，盡量減少其他物質(zhì)的干擾。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種快速檢測(cè)六堡茶提取物中茶多糖含量的檢測(cè)方法，該方法可準(zhǔn)確測(cè)定茶多糖的含量。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種六堡茶提取物中茶多糖的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

步驟1：配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照；

步驟2：將六堡茶提取物樣品配制成檢測(cè)液；

步驟3：用紫外分光光度法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和檢測(cè)液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟4：計(jì)算六堡茶提取物樣品中茶多糖含量。

需要說(shuō)明的是，步驟1中的配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的具體步驟為：取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成每1ml中含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

需要說(shuō)明的是，所述的步驟2中的將六堡茶提取物樣品配制成檢測(cè)液，包括以下步驟：

步驟S1：取六堡茶3g，置250ml燒瓶中，分別加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合并濾液；

步驟S2：加乙醇調(diào)整至乙醇含量80％，過(guò)濾，用濃度為80％乙醇洗滌濾渣3次，30ml/次，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加50ml水，加熱回流0.5h，趁熱過(guò)濾，用65-100℃熱水洗滌，合并濾液，定容至100ml；

步驟S3：精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為0.5mol/L，在40℃下水解30min，冷卻后調(diào)pH至中性；

步驟S4：將酸水解后的多糖提取液置規(guī)格為15cm×2cm的聚酰胺層析柱中，用70-90℃熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。

需要說(shuō)明的是，步驟3中所述的紫外分光光度法測(cè)定為：將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和檢測(cè)液分別加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻，加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第1管為空白，照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VB紫外-可見(jiàn)分光光度法，在487nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

需要說(shuō)明的是，步驟3所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，包括以下步驟：

步驟SS1：分別精密吸取對(duì)照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分別置10ml具塞試管中，分別加二純水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振搖混勻；

步驟SS2：加5.0ml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘；

步驟SS3：以第1管為空白，參照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VB紫外-可見(jiàn)分光光度法，在487nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度和質(zhì)量作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明采用酸水解和聚酰胺柱分離兩個(gè)步驟改進(jìn)了六堡茶取物樣品的制備方法，有效地分離了對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾的茶色素等物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確的多糖含量測(cè)定。

2.直接采用苯酚-硫酸法檢測(cè)由于有茶色素的干擾造成結(jié)果偏高；采用本法檢測(cè)有效去除了茶色素等物質(zhì)的干擾，結(jié)果較準(zhǔn)確。