[發明專利]一種構建二球懸鈴木子葉高頻再生體系的方法及其應用

有效

• 申請號: 201710109602.4
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106857259B
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 包滿珠;暴志茹;張佳琪;劉國鋒;張艷萍;邵長生;王小林
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A01H4/00
• 代理公司: 42001 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 張紅兵

1.一種構建二球懸鈴木子葉高頻再生體系的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)球果采集

在懸鈴木球果成熟期的10-12月份，從成年的二球懸鈴木樹上采集飽滿的當年生球果；

(2)種子消毒

取球果剝離出種子，先用清水揉搓脫去種毛；將搓洗干凈的種子放于超凈工作臺上按以下程序進行消毒處理：先用75％的酒精消毒40s，再用0.1％的升汞溶液消毒40min，期間晃動種子2-3次，最后用無菌水沖洗3次；

(3)子葉不定芽的再生誘導

將消毒后的種子，放于無菌的培養皿中，培養皿內鋪無菌的濕潤濾紙，在光下萌發培養1周，待子葉展開后，取靠近芽點的中下部1/2子葉接種于子葉不定芽再生誘導培養基中，于光下培養45d至切口處誘導出不定芽，期間每2周更換一次新鮮的子葉不定芽再生誘導培養基；培養溫度為25℃±2℃，光照強度為2400lx，光周期為16h光照/8h黑暗；

(4)子葉不定芽的增殖和生根培養

待步驟(3)中子葉再生出的不定芽長至2-3cm時切下，轉移至子葉不定芽增殖培養基中于光下培養40-45d，取頂端3-4cm的頂芽轉入到子葉不定芽生根培養基中進行生根培養；培養溫度為25℃±2℃，光照強度為2400lx，光周期為16h光照/8h黑暗；

其中：

培養基成分及其配比如下：

子葉不定芽再生誘導培養基：MS，附加6-BA4.0mg/L，NAA0.2mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0；

子葉不定芽增殖培養基：MS，附加6-BA0.3mg/L，NAA0.05mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0；

子葉不定芽生根培養基：1/2MS，附加IBA0.1mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0。

2.一種權利要求1所述構建二球懸鈴木子葉高頻再生體系的方法中使用的專用培養基，其特征在于，所述的專用培養基的配比包括：

子葉不定芽再生誘導培養基：MS，附加6-BA4.0mg/L，NAA0.2mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0；

子葉不定芽增殖培養基：MS，附加6-BA0.3mg/L，NAA0.05mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0；

子葉不定芽生根培養基：1/2MS，附加IBA0.1mg/L，蔗糖3.0％，瓊脂0.75％，補足蒸餾水至1L，調培養基的pH至5.8-6.0。