[發明專利]定量保存微生物的冷凍干燥小球的制備方法有效
| 申請號： | 201710108142.3 | 申請日： | 2017-02-27 |
| 公開（公告）號： | CN106929421B | 公開（公告）日： | 2020-12-01 |
| 發明（設計）人： | 傅博強;陳敏璠;林婧;張玲;隋志偉;王晶 | 申請（專利權）人： | 中國計量科學研究院 |
| 主分類號： | C12N1/04 | 分類號： | C12N1/04 |
| 代理公司： | 北京慧誠智道知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11539 | 代理人： | 李楠 |
| 地址： | 100029 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 定量 保存 微生物 冷凍 干燥 小球 制備 方法 | ||
1.一種定量保存微生物的冷凍干燥小球的制備方法,其特征在于，所述制備方法包括：
將目標菌株經營養瓊脂接種及單菌落營養肉湯增菌后，獲取對數生長期后期的微生物菌液；
將所述微生物菌液進行稀釋，并使用600nm波長的光吸收輔助控制菌濃度，獲得定量濃度的均勻菌懸液；
將保護劑與無菌水混合配成保護劑溶液；其中，所述保護劑溶液中包括5g/ml～20g/ml的蛋白質、2g/ml～15g/ml的水溶性糖、0.5g/ml～10g/ml的谷氨酸鈉和0g/ml～5g/ml的表面活性劑；
將所述菌懸液與所述保護劑溶液進行混合，得到混合液；其中，所述菌懸液與所述保護劑溶液的混合比例為3:7～1:9，所述混合液的菌濃度為102cfu/50μl～106cfu/50μl；
取定量的所述混合溶液，利用液氮將所述混合溶液冷凍成球，然后進行預凍；其中，所述預凍時間不少于2小時，預凍溫度為-80℃～-20℃；
將所述預凍后的小球進行真空冷凍干燥，得到所述冷凍干燥小球。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述將預凍后的小球進行真空冷凍干燥，得到所述冷凍干燥小球具體為：
將預凍后的小球在-50℃～-35℃保存4小時～6小時進行定型，使所述小球內的水分部分升華；
再將所述小球在-35℃～-20℃進行主干燥；其中，所述主干燥的時間為8小時～12小時；
將所述主干燥后的小球在10℃～25℃進行解析干燥；其中，所述解析干燥的時間為7小時～10小時。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括：將所述冷凍干燥小球在凍干機內進行真空密封保存；其中，所述保存溫度為-80℃～-20℃。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在所述將保護劑與無菌水混合配成保護劑溶液之前，所述方法還包括：
將所述保護劑用伽馬射線進行輻照滅菌。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白質為人血清白蛋白、胎牛血清、脫脂奶粉、全脂奶粉、卵清蛋白、酪蛋白中的至少一種。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水溶性糖為蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、果糖、海藻糖、乳糖、半乳糖中的至少一種。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述表面活性劑為Triton WR-1339、甘油、Macrocyclon、吐溫80中的至少一種。
8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述得到冷凍干燥小球的含菌量為50CFU/球～108CFU/球。
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