[發明專利]一種高保真快速擴增融合酶及其制備方法有效
| 申請號： | 201710102864.8 | 申請日： | 2017-02-24 |
| 公開（公告）號： | CN106754816B | 公開（公告）日： | 2020-10-27 |
| 發明（設計）人： | 荀恒杰;陳旭;陳剛 | 申請（專利權）人： | 依科賽生物科技(太倉)有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/12 | 分類號： | C12N9/12;C12N15/62;C12N15/63 |
| 代理公司： | 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙) 32267 | 代理人： | 馬廣旭 |
| 地址： | 215400 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高保真 快速 擴增 融合 及其 制備 方法 | ||
1.一種高保真快速擴增融合酶，其特征在于：所述融合酶的氨基酸序列為SEQ ID NO.17所顯的氨基酸序列。
2.根據權利要求1所述的高保真快速擴增融合酶，其特征在于：所述非特異性雙鏈結合區的氨基酸序列為SEQ ID NO. 14所顯的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
3.根據權利要求1所述的高保真快速擴增融合酶，其特征在于：所述經過多步生物技術方法改造后的嗜熱古細菌DNA聚合酶的氨基酸序列為SEQ ID NO. 15所顯的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
4.根據權利要求1所述的高保真快速擴增融合酶，其特征在于：編碼所述融合酶的核苷酸序列為核苷酸序列SEQ ID NO. 16，所述SEQ ID NO.16為SEQ ID NO. 14和SEQ ID NO.15所顯的核苷酸序列，并連接到原核表達質粒的啟動子下而形成表達載體。
5.根據權利要求1-4任一項所述的高保真快速擴增融合酶的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
（1）采用全基因合成的重疊PCR延伸方法，利用高保真酶合成SEQ ID NO. 14和SEQ IDNO. 15所顯示的核苷酸序列；
（2）將SEQ ID NO. 14和SEQ ID NO. 15所合成兩個片段的核苷酸序列和編碼連接肽的核苷酸序列進行拼接連接；
（3）將測序正確的步驟（2）的核苷酸序列連接到表達載體；
（4）轉化到表達菌株，進行誘導表達；
（5）所述菌株經超聲破碎、離心收集、過濾除顆粒和純化，得所述高保真快速擴增融合酶。
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