[發明專利]一種雙靶標細胞膜色譜柱及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710100595.1
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN107064394B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 賀浪沖;韓省力;張濤;呂艷妮;馬維娜
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: G01N30/60
• 分類號: G01N30/60;G01N30/02;B01D15/10;B01J20/283
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 岳培華

本發明公開了一種雙靶標細胞膜色譜柱及其制備方法和應用，屬于色譜科學、細胞生物學及受體藥理學領域。該方法將兩種不同受體類型的細胞分別制備成細胞膜色譜固定相，再將兩種細胞膜色譜固定相混合均勻，得到兩種受體類型的混合固定相，最后將混合固定相濕法裝柱，構成雙靶標細胞膜色譜柱。本發明制備的雙靶標細胞膜色譜柱在保持原有細胞膜色譜柱活性識別和色譜分離特性的基礎上，增加了活性識別的位點，能夠識別復雜體系中“單組分單靶標”、“單組分雙靶標”及“多組分雙靶標”的目標組分，為多元藥物的開發提供新的技術手段，并顯著提高復雜體系中目標組分的篩選效率。

技術領域

本發明屬于色譜科學、細胞生物學及受體藥理學等領域，涉及一種雙靶標細胞膜色譜柱及其制備方法和應用。

背景技術

細胞膜色譜是一種有效的從復雜體系中直接篩選識別目標組分的新技術。但由于中藥具有多組分、多作用靶點的特殊性，單靶標細胞膜色譜柱在對復雜體系中目標組分進行篩選時，可能忽略同一組分與不同受體作用，對于不同組分與不同受體作用的篩選效率較低。

雙靶標細胞膜色譜柱在保持原有單靶標細胞膜色譜柱活性識別和色譜分離特性的基礎上，增加了同時活性識別兩種不同靶標的可能性，對復雜體系中“單組分雙作用靶標”及“多組分雙作用靶標”目標組分的發現提供了新方法，為多元藥物的開發提供了新技術手段。

但目前關于雙靶標細胞膜色譜柱及其制備方法等技術還鮮有報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雙靶標細胞膜色譜柱及其制備方法和應用，該雙靶標細胞膜色譜柱在保持原有細胞膜色譜柱活性識別和色譜分離特性的基礎上，增加了活性識別的位點，對復雜體系中“單組分雙作用靶標”及“雙組分/多組分雙作用靶標”成分的發現提供了新方法，為多元藥物的開發提供了新的技術手段。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種雙靶標細胞膜色譜柱，所述雙靶標細胞膜色譜柱中填充有雙靶標細胞膜色譜固定相，所述雙靶標細胞膜色譜固定相是由兩種不同受體的細胞膜色譜固定相混合而成的，所述兩種不同受體的細胞膜色譜固定相是由兩種表達不同受體類型的細胞的細胞膜分別包裹大孔硅膠制成的。

所述兩種不同受體的細胞膜色譜固定相，一種是由高表達IgE受體的RBL-2H3細胞的細胞膜包裹大孔硅膠制成的，另一種是由高表達MrgprX2受體的LAD2細胞的細胞膜包裹大孔硅膠制成的。

所述兩種不同受體的細胞膜色譜固定相，一種是由利用基因工程技術構建的高表達EGFR受體的HEK293細胞的細胞膜包裹大孔硅膠制成的，另一種是由利用基因工程技術構建的高表達FGFR4受體的HEK293細胞的細胞膜包裹大孔硅膠制成的。

所述的雙靶標細胞膜色譜柱在篩選識別單組分單靶標、單組分雙靶標以及多組分雙靶標的目標組分方面的應用。

所述的雙靶標細胞膜色譜柱在篩選識別藥物中致敏組分及潛在致敏組分方面的應用。

所述的雙靶標細胞膜色譜柱在篩選識別復雜體系中抗血管生成抑制劑方面的應用。

所述的雙靶標細胞膜色譜柱的制備方法，包括以下步驟：

1)分別培養兩種表達不同受體類型的細胞，當培養的兩種細胞計數分別不低于10⁷個時，去除培養基，分別獲得兩種細胞；

2)將獲得的兩種細胞分別用Tris-HCl混懸后置于細胞超聲破碎儀中進行破碎，然后通過差速離心分離出兩種細胞的細胞膜；

3)用PBS緩沖液將兩種細胞的細胞膜分別配制成兩種細胞膜懸液，在真空條件下將兩種細胞膜懸液分別加入到已預先活化的大孔硅膠內，攪拌均勻后靜置過夜，得到兩種不同受體的細胞膜色譜固定相；