[發(fā)明專利]一種雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710100595.1
• 申請(qǐng)日: 2017-02-23
• 公開（公告）號(hào): CN107064394B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀浪沖;韓省力;張濤;呂艷妮;馬維娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/60
• 分類號(hào): G01N30/60;G01N30/02;B01D15/10;B01J20/283
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 岳培華

1.一種雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱，其特征在于：所述雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱中填充有雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜固定相，所述雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜固定相是由兩種具有不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相混合而成的，所述兩種不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相是由兩種表達(dá)不同受體類型的細(xì)胞的細(xì)胞膜分別包裹大孔硅膠制成的。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱，其特征在于：所述兩種不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相，一種是由高表達(dá)IgE受體的RBL-2H3細(xì)胞的細(xì)胞膜包裹大孔硅膠制成的，另一種是由高表達(dá)MrgprX2受體的LAD2細(xì)胞的細(xì)胞膜包裹大孔硅膠制成的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱，其特征在于：所述兩種不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相，一種是由利用基因工程技術(shù)構(gòu)建的高表達(dá)EGFR受體的HEK293細(xì)胞的細(xì)胞膜包裹大孔硅膠制成的，另一種是由利用基因工程技術(shù)構(gòu)建的高表達(dá)FGFR4受體的HEK293細(xì)胞的細(xì)胞膜包裹大孔硅膠制成的。

4.權(quán)利要求1所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱在篩選識(shí)別單組分單靶標(biāo)、單組分雙靶標(biāo)以及多組分雙靶標(biāo)的目標(biāo)組分方面的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求2所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱在篩選識(shí)別藥物中致敏組分及潛在致敏組分方面的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求3所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱在篩選識(shí)別復(fù)雜體系中抗血管生成抑制劑方面的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)分別培養(yǎng)兩種表達(dá)不同受體類型的細(xì)胞，當(dāng)培養(yǎng)的兩種細(xì)胞計(jì)數(shù)分別不低于10⁷個(gè)時(shí)，去除培養(yǎng)基，分別獲得兩種細(xì)胞；

2)將獲得的兩種細(xì)胞分別用Tris-HCl混懸后置于細(xì)胞超聲破碎儀中進(jìn)行破碎，然后通過(guò)差速離心分離出兩種細(xì)胞的細(xì)胞膜；

3)用PBS緩沖液將兩種細(xì)胞的細(xì)胞膜分別配制成兩種細(xì)胞膜懸液，在真空條件下將兩種細(xì)胞膜懸液分別加入到已預(yù)先活化的大孔硅膠內(nèi)，攪拌均勻后靜置過(guò)夜，得到兩種不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相；

4)將得到的兩種不同受體的細(xì)胞膜色譜固定相混合均勻，用裝柱機(jī)濕法裝入柱芯中，即得到雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雙靶標(biāo)細(xì)胞膜色譜柱的制備方法，其特征在于：所述柱芯的長(zhǎng)度為10mm，內(nèi)徑為3.0mm。