[發明專利]成纖維細胞的培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201710099729.2
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106635972B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 車七石
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種誘導性多能干細胞誘導成成纖維細胞的培養基及其制備方法。該培養基包括基礎培養液和添加物，所述基礎培養液為體積比為1:0.5～2的H?DMEM培養液和F12培養液；以在所述基礎培養液中的濃度計，所述添加物包括如下組分：非必須氨基酸、谷氨酰胺衍生物、胰島素、氫化可的松、轉鐵蛋白、亞硒酸鈉、成纖維細胞生長因子、雌二醇、黃體酮、8?溴環磷腺苷、人卵泡刺激素。該培養基能夠獲得較現有技術更高的成纖維細胞分化概率，并且能夠穩定傳代，提高細胞的增殖速度，為皮膚組織工程提供成纖維細胞的種子細胞來源，同時整個過程沒有用到血清，有效的避免了動物源性病原體帶來的風險，提高了臨床應用的安全性。

技術領域

本發明涉及細胞培養基，特別是涉及一種成纖維細胞的培養基及其制備方法。

背景技術

皮膚組織工程是近幾年的研究熱點。但是皮膚的相關細胞都屬于終末分化細胞，很難在體外進行大規模的培養擴增，同時種子細胞的來源問題也阻礙了皮膚組織工程的發展。

由于自體的種子細胞來源有限，異體的種子細胞存在排斥反應，干細胞又存在倫理問題，因此從尿液中收集尿液細胞，將尿液細胞重編程為誘導性多能干細胞(ips細胞)，ips細胞再誘導成為角質形成細胞、成纖維細胞、汗腺細胞、毛乳頭細胞等，即可解決皮膚組織工程的種子來源問題，且從尿液中獲得細胞，方便快捷，不用通過創傷獲取，來源廣泛。

但是，目前的采用的將ips細胞誘導成為成纖維細胞的培養基，如MEF培養基的分化概率較低，難以滿足實際需求，且含有血清，會帶來動物源性病原體風險，影響臨床應用的安全性。

發明內容

基于此，有必要提供一種不含血清，安全性高，且提高誘導性多能干細胞向成纖維細胞分化比例的成纖維細胞的培養基。

一種成纖維細胞的培養基，包括基礎培養液和添加物，所述基礎培養液為體積比為1:0.5～2的H-DMEM培養液和F12培養液；以在所述基礎培養液中的添加量計，所述添加物包括如下組分：

在其中一個實施例中，所述添加物包括如下組分：

在其中一個實施例中，所述添加物還包括抗生素。

在其中一個實施例中，所述抗生素包括在所述基礎培養液中添加量為0.05～0.2mg/mL的青霉素以及在所述基礎培養液中添加量為0.05～0.2mg/mL的鏈霉素。

在其中一個實施例中，所述添加物還包括自由基清除劑。

在其中一個實施例中，所述自由基清除劑為在所述基礎培養液中添加量為0.05～0.2mmol/L的β-巰基乙醇。

本發明還提供所述的成纖維細胞的培養基的制備方法，包括如下步驟：

按所述體積比混合H-DMEM培養液和F12培養液，得所述基礎培養液；

將所述胰島素、氫化可的松、轉鐵蛋白、亞硒酸鈉、非必需氨基酸、谷氨酰胺衍生物、成纖維細胞生長因子、雌二醇、黃體酮、8-溴環磷腺苷，人卵泡刺激素添加至所述基礎培養液中，即可。

本發明還提供所述的成纖維細胞的培養基在成纖維細胞培養中的應用。

本發明還提供一種將誘導性多能干細胞誘導為成纖維細胞的方法，包括如下步驟：

采用mTeSR1培養基對誘導性多能干細胞進行培養，當匯合度為75～85％時，消化為單細胞；

取適量所述單細胞，以EB擬胚體形成培養基進行培養，形成擬胚體；

將所述擬胚體接種至所述培養基中培養，即得成纖維細胞。