[發(fā)明專利]成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710099729.2
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106635972B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 車七石
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州潤虹醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種將誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基，其特征在于，由基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加物組成；所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液為體積比為1:0.5～2的H-DMEM培養(yǎng)液和F12培養(yǎng)液；以在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中的添加量計，所述添加物由如下組分組成：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，以在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中的添加量計，所述添加物由如下組分組成：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加物還包括抗生素。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述抗生素包括在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加量為0.05～0.2mg/mL的青霉素以及在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加量為0.05～0.2mg/mL的鏈霉素。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加物還包括自由基清除劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述自由基清除劑為在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加量為0.05～0.2mmol/L的β-巰基乙醇。

7.權(quán)利要求1-6任一項所述的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

按所述體積比混合H-DMEM培養(yǎng)液和F12培養(yǎng)液，得所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液；

將所述胰島素、氫化可的松、轉(zhuǎn)鐵蛋白、亞硒酸鈉、非必需氨基酸、谷氨酰胺衍生物、成纖維細(xì)胞生長因子、雌二醇、黃體酮、8-溴環(huán)磷腺苷，人卵泡刺激素添加至所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，即可。

8.權(quán)利要求1-6任一項所述的培養(yǎng)基在成纖維細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

9.一種將誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為成纖維細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用mTeSR1培養(yǎng)基對誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)匯合度為75～85％時，消化為單細(xì)胞；

取適量所述單細(xì)胞，以EB擬胚體形成培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，形成擬胚體；

將所述擬胚體接種至權(quán)利要求1-6任一項所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即得成纖維細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的將誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為成纖維細(xì)胞的方法，其特征在于，所述擬胚體的培養(yǎng)條件為：采用CO₂濃度為5～7％，溫度為37℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～50h。