[發(fā)明專利]利用數字PCR檢測馬鈴薯X病毒的方法及其專用成套試劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710099651.4
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106868209A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設計）人: 張永江;相寧;黃潔芳;王晨光;付偉;朱鵬宇
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,何葉喧

1.檢測馬鈴薯X病毒的成套試劑，由引物對X1和探針PVX-p組成；所述引物對X1由引物PVX-f和引物PVX-r組成；所述引物對X1的靶序列含有特異DNA片段；所述特異DNA片段為如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

y2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；

所述探針PVX-p為20-30個核苷酸組成的單鏈DNA分子，與所述特異DNA片段中的部分區(qū)段相同。

2.如權利要求1所述成套試劑，其特征在于：

所述引物PVX-f為如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的單鏈DNA分子；

a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物PVX-r為如下b1)或b2)：

b1)序列表中序列2所示的單鏈DNA分子；

b2)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述探針PVX-p為如下c1)或c2)：

c1)序列表中序列3所示的單鏈DNA分子；

c2)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的單鏈DNA分子。

3.如權利要求1或2所述成套試劑，其特征在于：所述探針PVX-p的末端具有熒光標記。

4.權利要求1或2所述成套試劑中的所述引物對X1。

5.c1)或c2)：

c1)權利要求1至3任一所述成套試劑的制備方法，為將權利要求1至3任一所述成套試劑中的所述引物PVX-f、所述引物PVX-r和所述探針PVX-p分別單獨包裝；

c2)權利要求4所述引物對X1的制備方法，為將權利要求4所述引物對X1中各引物分別單獨包裝。

6.權利要求1至3任一所述成套試劑或權利要求4所述引物對X1的應用，為如下d1)或d2)或d3)或d4)：

d1)制備用于檢測或輔助檢測馬鈴薯X病毒的試劑盒；

d2)檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有或疑似含有馬鈴薯X病毒；

d3)制備用于鑒定或輔助鑒定馬鈴薯X病毒的試劑盒；

d4)鑒定或輔助鑒定待測病毒是否為候選的馬鈴薯X病毒。

7.含有權利要求1至3任一所述成套試劑或權利要求4所述引物對X1的試劑盒。

8.權利要求7所述試劑盒的應用，為如下d2)或d4)：

d2)檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有或疑似含有馬鈴薯X病毒；

d4)鑒定或輔助鑒定待測病毒是否為候選的馬鈴薯X病毒。

9.一種檢測待測樣品是否含有馬鈴薯X病毒的方法，為A1)或A2)或A3)：

A1)以待測樣品的cDNA為模板，以權利要求1至3任一所述成套試劑進行數字PCR，然后進行如下評判：如果所述成套試劑可以實現對所述cDNA的數字PCR，則待測樣品中含有或疑似含有馬鈴薯X病毒；如果所述成套試劑不能實現對所述cDNA的數字PCR，則待測樣品不含有或疑似不含有馬鈴薯X病毒；

A2)以待測樣品的cDNA為模板，以權利要求4所述引物對X1進行PCR擴增，然后進行如下評判：如果所述引物對X1可以實現對所述cDNA的PCR擴增，則待測樣品中含有或疑似含有馬鈴薯X病毒；如果所述引物對X1不能實現對所述cDNA的PCR擴增，則待測樣品不含有或疑似不含有馬鈴薯X病毒；

A3)檢測待測樣品的cDNA中是否含有特異DNA片段，然后進行如下評判：如果待測樣品的cDNA中含有特異DNA片段，則待測樣品中含有或疑似含有馬鈴薯X病毒；如果待測樣品的cDNA中不含有特異DNA片段，則待測樣品不含有或疑似不含有馬鈴薯X病毒；

所述特異DNA片段為如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

y2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。

10.一種鑒定待測病毒是否為候選的馬鈴薯X病毒的方法，為B1)或B2)或B3)：

B1)以待測病毒的cDNA為模板，以權利要求1至3任一所述成套試劑進行數字PCR，然后進行如下評判：如果所述成套試劑可以實現對所述cDNA的數字PCR，則待測病毒為候選的馬鈴薯X病毒；如果所述成套試劑不能實現對所述cDNA的數字PCR，則待測病毒為候選的非馬鈴薯X病毒；

B2)以待測病毒的cDNA為模板，以權利要求4所述引物對X1進行PCR擴增，然后進行如下評判：如果所述引物對X1可以實現對所述cDNA的PCR擴增，則待測病毒為候選的馬鈴薯X病毒；如果所述引物對X1不能實現對所述cDNA的PCR擴增，則待測病毒為候選的非馬鈴薯X病毒；

B3)檢測待測病毒的cDNA中是否含有特異DNA片段，然后進行如下評判：如果待測病毒的cDNA中含有特異DNA片段，則待測病毒為候選的馬鈴薯X病毒；如果待測病毒的cDNA中不含有特異DNA片段，則待測病毒為候選的非馬鈴薯X病毒；

所述特異DNA片段為如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

y2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。