[發(fā)明專利]鉛離子環(huán)境污染中直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710099363.9
• 申請(qǐng)日: 2017-02-23
• 公開（公告）號(hào): CN106872708B
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜金慶;劉長(zhǎng)忠;張慧輝;王自良;楊雪峰;李廣領(lǐng);齊永華;范國(guó)英;張海棠;李藝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 代芳

本發(fā)明提供了一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法鉛離子檢測(cè)試劑盒，包括：包被有羊抗鼠IgG二抗的檢測(cè)板，所述檢測(cè)板真空密封包裝；所述羊抗鼠IgG二抗的包被濃度為50～200μg/mL；質(zhì)量濃度為20～50μg/mL的酶標(biāo)Pb?ITCBE鰲合物半抗原；質(zhì)量濃度為10～20μg/mL的抗鉛離子單克隆抗體溶液；所述抗鉛離子單克隆抗體溶液由Pb?ITCBE?cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制備而來(lái)；1.0～3.0mol/L的終止液；樣品稀釋液；底物顯色液；洗滌液；鉛離子標(biāo)準(zhǔn)品溶液；質(zhì)量濃度為10～20mg/mL的EDTA處理液。本發(fā)明提供試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，同時(shí)具有檢測(cè)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)境檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鉛離子環(huán)境污染中直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

微量鉛元素是有機(jī)體必需的金屬微量元素之一。隨著人類對(duì)鉛的開采、冶煉、加工及商業(yè)制造的增多，大量的鉛以不同的形式進(jìn)入自然界，并隨著生物鏈的傳遞而進(jìn)入生物圈。由于鉛具有生物放大效應(yīng)和不易被代謝轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，不僅污染了水源、大氣和土壤，也嚴(yán)重威脅人類和動(dòng)物的安全。1938年，英國(guó)學(xué)者首次報(bào)道牧草中鉛的含量過(guò)高，可使放牧羊產(chǎn)生以劇烈腹瀉和被毛褪色為特征性癥狀的鉛中毒癥，稱之為“Teart”病。

在我國(guó)，鉛和精煉鉛產(chǎn)量居世界第三位，主要用于蓄電池制造、顏料、合金等行業(yè)。1923年開始在汽油中加入鉛用作抗爆劑以后，更加速了全球性鉛的污染。鉛具有高蓄積性與多親和性，可通過(guò)消化、呼吸等途徑被機(jī)體吸收，對(duì)人體無(wú)任何生理功能。急性鉛中毒表現(xiàn)為胃疼、頭疼、顫抖和神經(jīng)性煩燥，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致昏迷，甚至死亡。慢性鉛中毒大多表現(xiàn)為神經(jīng)毒性，對(duì)血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等造成一定的損害。鉛是對(duì)兒童威脅最大的環(huán)境污染物之一，兒童對(duì)鉛元素較成年人敏感，由于血腦屏障沒(méi)有發(fā)育完整，嬰幼兒的血鉛水平達(dá)到100μg/L便可引起認(rèn)知功能障礙或發(fā)育遲緩。鑒于鉛污染和危害性較大，我國(guó)制定了土壤、食品、水體、玩具等涉鉛領(lǐng)域的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全要求無(wú)公害水產(chǎn)品(GB18406，4-2001)對(duì)鉛含量限定在≤0.5mg/kg，地下水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB/T14848-93)中規(guī)定，集中式生活飲用水水源及工農(nóng)業(yè)用水的鉛離子限量為≤0.5mg/L，熟肉制品(GB2725-2005)中要求鉛含量≤0.5mg/kg。

目前動(dòng)物性食品及環(huán)境水樣中Pb²⁺污染的主要檢測(cè)方法包括傳統(tǒng)的理化檢驗(yàn)和免疫學(xué)檢驗(yàn)兩種類型的方法。理化檢驗(yàn)包括紫外分光光度法(UV)、電化學(xué)分析法、原子吸收光譜法(AAS)、電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)、氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法(HG-AFS)和中子活化分析法(NAA)等，它們是目前Pb²⁺污染檢測(cè)的主要方法，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，但由于需要昂貴的儀器設(shè)備、熟練的專業(yè)人員、煩瑣費(fèi)時(shí)、周期長(zhǎng)、費(fèi)用高、不能現(xiàn)場(chǎng)操作、樣品篩檢量小等缺陷，其應(yīng)用受到了限制。免疫學(xué)檢驗(yàn)方法是以抗原抗體分子的特異性、可逆性反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，包括熒光偏振免疫測(cè)定法(FPIA)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)KinExA免疫測(cè)定法(KIA)、膠體金免疫層析試驗(yàn)測(cè)定法(GICA)和微懸臂梁免疫傳感器(MIS)等，由于抗原抗體的結(jié)合具有高度的選擇性和敏感性，這一技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、敏感、特異、經(jīng)濟(jì)、篩檢量大等優(yōu)勢(shì)，代表著重金屬離子檢測(cè)的發(fā)展方向。目前，國(guó)內(nèi)外重金屬鉛離子污染免疫檢測(cè)技術(shù)研究非常活躍，其中公告號(hào)為CN103472230B的專利公開了一種檢測(cè)鉛離子的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫試劑盒及其制備方法，其檢測(cè)靈敏度為10.31ng/mL，并且檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)鉛離子試劑盒及其應(yīng)用，使所述試劑盒具有檢測(cè)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法鉛離子檢測(cè)試劑盒，包括：