[發(fā)明專利]細(xì)菌性莢膜多糖的純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710098943.6 | 申請日: | 2017-02-23 |
| 公開(公告)號(hào): | CN107043431B | 公開(公告)日: | 2020-06-30 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 祝先潮;陳春光 | 申請(專利權(quán))人: | 上海瑞宙生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào): | C08B37/00 | 分類號(hào): | C08B37/00 |
| 代理公司: | 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31218 | 代理人: | 翟羽 |
| 地址: | 201210 上海市浦東*** | 國省代碼: | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 細(xì)菌性 莢膜 多糖 純化 方法 | ||
1.細(xì)菌性莢膜多糖的純化方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)滅活劑處理肺炎鏈球菌發(fā)酵培養(yǎng)液,得到包含有細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)、核酸和多糖的細(xì)菌溶解液;
(2)在步驟(1)獲得的細(xì)菌溶解液中加酸調(diào)節(jié)pH值至3.0~6.5,沉淀雜質(zhì),離心和微濾去除沉淀物獲得多糖澄清液,所述酸是磷酸、乙酸、鹽酸、硫酸或硝酸中的一種或幾種;
(3)用截留分子量10—100KDa的膜對步驟(2)獲得的多糖澄清液進(jìn)行超濾換液并濃縮,獲得去除大部分可溶性蛋白質(zhì)、核酸以及大顆粒雜質(zhì)含量的莢膜多糖溶液;
(4)將步驟(3)獲得的莢膜多糖溶液組合使用復(fù)合型離子交換層析和羥基磷酸灰質(zhì)鹽層析進(jìn)行色譜層析,獲得純化的莢膜多糖溶液;所述的組合使用是指先使用復(fù)合型離子交換層析,后使用羥基磷酸灰質(zhì)鹽層析或者先使用羥基磷酸灰質(zhì)鹽層析,后使用復(fù)合型離子交換層析;所述復(fù)合型離子交換層析填料選自Capto Adhere、TOYOPEARL MX-Trp-650M、Cellufine MAX AminoButyl,所述羥基磷酸灰質(zhì)鹽層析為CHT? CeramicHydroxyapatite;
(5)濃縮及超濾步驟(4)獲得的莢膜多糖溶液,并進(jìn)行無菌過濾、保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌性莢膜多糖的純化方法,其特征在于,步驟(2)中微濾所用微濾膜的膜孔徑為0.22,0.45,0.65,1.0 um 中的任意一種。
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