[發明專利]一種對香豆酸-3-羥化酶及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201710098484.1
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106906189B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 汪仁;李宜奎;錢彬彬;徐晟;李曉丹;程麗;夏冰
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12P7/42
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

1.一種對香豆酸-3-羥化酶，其特征在于，所述的對香豆酸-3-羥化酶為氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的蛋白質。

2.編碼權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種載體，其特征在于，它含有權利要求2所述的多核苷酸。

4.權利要求3所述的載體的用途，其特征在于：

(a)表達權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶；或

(b)抑制權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶的表達；或

(c)抑制權利要求2所述的多核苷酸的表達。

5.一種宿主細胞，其特征在于，它含有權利要求3所述的載體或基因組中整合有權利要求2所述的多核苷酸。

6.權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶的用途，其特征在于，催化對香豆酸合成咖啡酸。

7.一種表達構建物，其特征在于，所述表達構建物包括以下酶的基因表達盒：(a)權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶；和

(b)細胞色素P450還原酶。

8.一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞中包括權利要求7所述的表達構建物。

9.如權利要求8所述的一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞是原核宿主細胞或真核宿主細胞；所述的原核宿主細胞為大腸桿菌、枯草桿菌、運動假單胞菌或乳酸菌，所述的真核宿主細胞為真菌細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞；所述的真菌細胞為酵母細胞。

10.如權利要求8所述的一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞是包含有對香豆酸-3-羥化酶的底物的細胞。

11.如權利要求8所述的一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞是內源存在對香豆酸的細胞。

12.權利要求7所述的表達構建物或權利要求8-11任一項所述的宿主細胞的用途，其特征在于，催化對香豆酸合成咖啡酸。

13.一種生產咖啡酸的方法，其特征在于，利用權利要求1所述的對香豆酸-3-羥化酶生產咖啡酸；所述的方法包括：以權利要求3所述的載體或權利要求7所述的表達構建物轉化宿主細胞，培養轉化的宿主細胞，合成咖啡酸。

14.如權利要求13所述的一種生產咖啡酸的方法，其特征在于，所述的宿主細胞是原核宿主細胞或真核宿主細胞；所述的原核宿主細胞為大腸桿菌、枯草桿菌、運動假單胞菌或乳酸菌；所述的真核宿主細胞為真菌細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞；所述的真菌細胞為酵母細胞。

15.如權利要求13所述的一種生產咖啡酸的方法，其特征在于，所述宿主細胞是包含有對香豆酸-3-羥化酶的底物的細胞。

16.如權利要求13所述的一種生產咖啡酸的方法，其特征在于，所述宿主細胞是內源存在對香豆酸的細胞。