[發明專利]一種弓形蟲病間接ELISA診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201710098062.4
• 申請日: 2017-02-22
• 公開（公告）號: CN106970210B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 陳兆國;程龍;黃燕;米榮升;韓先干;陸珂
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;G01N33/53
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種重組弓形蟲基因，其特征在于，所述基因為弓形蟲TgPP1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種如權利要求1所述的重組弓形蟲基因編碼得到的重組蛋白rTgPP1。

3.一種弓形蟲病間接ELISA診斷試劑盒，其特征在于，所述診斷試劑盒中所用的檢測抗原為如權利要求2所述的重組蛋白rTgPP1。

4.如權利要求3所述的弓形蟲病間接ELISA診斷試劑盒，其特征在于，所述診斷試劑盒還包括：PBST洗滌液、5％脫脂奶粉封閉液、稀釋液、HRP標記的1:150000稀釋的兔抗豬IgG二抗、陽性血清、陰性血清、TMB-H₂O₂底物顯色液、2mol/L硫酸終止液和抗原包被液；所述抗原包被液為0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液。

5.如權利要求4所述的弓形蟲病間接ELISA診斷試劑盒，其特征在于，所述重組蛋白rTgPP1的質量和抗原包被液的體積的比值為1-5μg:1mL。

6.如權利要求3所述的弓形蟲病間接ELISA診斷試劑盒，其特征在于，所述重組蛋白rTgPP1是通過以下步驟制備而成：

S1、根據剛地弓形蟲ME49株PP1編碼基因序列，將相應的密碼子優化為細菌密碼子，兩端分別加NdeⅠ和HindⅢ限制性內切酶序列，NdeⅠ序列后插入6個His的編碼序列，全基因合成目的片段；

S2、目的片段和載體pET-30a(+)用限制性內切酶NdeⅠ和HindⅢ雙酶切后，用T4連接酶連接，轉化大腸埃希菌DH5α，提取重組質粒pET-30a(+)-TgPP1，經雙酶切和測序鑒定正確后轉化到BL21(DE3)感受態細胞中；

S3、將經鑒定已轉入重組質粒pET-30a(+)-TgPP1的BL21(DE3)感受態細胞經誘導表達、純化，獲得重組蛋白rTgPP1。