[發(fā)明專(zhuān)利]一種枯草芽孢桿菌的新型培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710097165.9
• 申請(qǐng)日: 2017-02-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106834178A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 麻林濤;王莉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 麻林濤
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種活性菌的培養(yǎng)方法，更具體而言，涉及一種枯草芽孢桿菌的新型培養(yǎng)方法，屬于微生物培養(yǎng)和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

枯草芽孢桿菌(Bacillus subtillis)屬于芽孢桿菌屬更進(jìn)一步的屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，呈單個(gè)細(xì)胞形式，無(wú)莢膜，通常為(0.7-0.8)×(2-3)微米。

枯草芽孢桿菌是一種益生菌，其具有多種生物功能，可應(yīng)用于多個(gè)技術(shù)領(lǐng)域中，例如：其具有繁殖速度快、產(chǎn)生大量?jī)?nèi)生消化酶、提高飼料營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)、提高肥效、可作為微生物農(nóng)藥、降解飼料中復(fù)雜有機(jī)物、促進(jìn)吸收、增強(qiáng)動(dòng)物免疫力和抗病力等等，從而在畜牧業(yè)、飼料業(yè)、農(nóng)藥、肥料、殺菌、石油開(kāi)采、園林業(yè)、蛋白質(zhì)多肽合成等多個(gè)領(lǐng)域中都具有廣泛的應(yīng)用，且其應(yīng)用領(lǐng)域和新的用途也一直在研究和拓展中。

正是由于枯草芽孢桿菌如此重要的作用，人們對(duì)于各種枯草芽孢桿菌制品以及枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基等進(jìn)行了大量的深入研究，取得了諸多的研究成果，例如：

CN1506455A公開(kāi)了一種植物枯草芽孢桿內(nèi)生菌及其制劑，其菌株BS-2(Bacillussubtilis，CGMCC NO.0819)，是由辣椒葉片內(nèi)分離，經(jīng)人工誘變篩選出的新菌株?？稍谳^低的菌液濃度下主動(dòng)進(jìn)入植物體內(nèi)，并能在植物體內(nèi)定殖繁殖和傳導(dǎo)；對(duì)植物同時(shí)具有促進(jìn)生長(zhǎng)和防病作用；其制劑用于浸種時(shí)對(duì)白菜和辣椒苗鮮重可增加90％以上；噴霧施用時(shí)，對(duì)辣椒苗和果的炭疽病、白菜炭疽病及香蕉炭疽病具有80％以上的防病效果。

CN1508243A公開(kāi)了一種用于凈化水質(zhì)的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，CCTCC，M202045以及用該菌在固體培養(yǎng)基，適當(dāng)?shù)奶肌⒌葪l件下培養(yǎng)、發(fā)酵然后經(jīng)干燥，生產(chǎn)一種有效凈化養(yǎng)殖水質(zhì)的枯草芽孢桿菌制劑。該菌去除水體COD效率高，能迅速降解有機(jī)物，具有一定的反硝化能力、降解殘?jiān)芰洼^強(qiáng)的降解硫化物的能力，小試結(jié)果表明：該菌在24小時(shí)消除COD可達(dá)76％；小試菌劑有效活菌數(shù)達(dá)3000億/克以上；中試菌劑有效活菌數(shù)達(dá)200億/克以上；同時(shí)具有耐鹽、耐滲透壓、維持養(yǎng)殖水體適宜pH等優(yōu)良特性。

CN101933946A公開(kāi)了一種禽類(lèi)枯草芽孢桿菌制劑的制備方法，包括下述步驟：(1)用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基復(fù)活枯草芽孢桿菌，作為一級(jí)種子；(2)將復(fù)活的菌液進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，采用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基加生物素培養(yǎng)，作為二級(jí)種子；(3)將牛肉湯蛋白胨、豆芽汁與二級(jí)種子液均勻混合，發(fā)酵培養(yǎng)；(4)將發(fā)酵液過(guò)濾，濾液即細(xì)菌代謝物制備口服液，菌體沉淀用石粉作為載體吸附干燥制備干粉，作為飼料添加劑。所述方法能改善固體發(fā)酵難于分離菌體的問(wèn)題，可極大地提高提純化效率，能滿(mǎn)足工業(yè)生產(chǎn)的需要。同時(shí)枯草芽孢桿菌代謝物的作用也被充分利用。所述菌體干粉飼料添加劑在應(yīng)用于禽類(lèi)時(shí)，能促進(jìn)禽類(lèi)的生長(zhǎng)及免疫力提高。

CN102168055A公開(kāi)了一種高芽孢率的枯草芽孢桿菌發(fā)酵方法，屬于微生物發(fā)酵工程領(lǐng)域。該方法是經(jīng)激活枯草芽孢桿菌、二步發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)目標(biāo)產(chǎn)品。先接種激活的枯草芽孢桿菌，培養(yǎng)溫度為35-38℃、罐壓0.02-0.06Mpa、通氣比例為1:0.5-1:1、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為150-200rpm，發(fā)酵培養(yǎng)8-14小時(shí)，得到種子菌液，再將種子菌液接種培養(yǎng)20-26小時(shí)，得到高芽孢率枯草芽孢桿菌液體產(chǎn)品。所述方法的培養(yǎng)基成分易得且價(jià)格便宜、工藝參數(shù)簡(jiǎn)單、發(fā)酵周期短，所得的枯草芽孢桿菌活菌數(shù)高，并且芽孢率高，達(dá)到3.0×10⁹CFU/ml以上，顯著提高產(chǎn)品的芽孢數(shù)和產(chǎn)品質(zhì)量。

CN102199569A公開(kāi)了一種用于復(fù)合微生物肥料的枯草芽孢桿菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括麩皮粉和小麥粉，重量百分含量分別為：小麥粉0.8％-1.5％，麩皮粉1.5-4％。所述培養(yǎng)基組成簡(jiǎn)單，配置時(shí)不需另外調(diào)節(jié)pH，并能促進(jìn)菌體生長(zhǎng)和芽孢形成，從而提高了產(chǎn)品質(zhì)量，降低了生產(chǎn)成本。

CN102220266A公開(kāi)了一種枯草芽孢桿菌制劑生產(chǎn)方法及其開(kāi)放式發(fā)酵方法。該生產(chǎn)方法包括以下步驟：種子培養(yǎng)基的制備、種子培養(yǎng)基的發(fā)酵、液體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備、菌種的液體發(fā)酵、枯草芽孢桿菌制劑中培養(yǎng)基成分的配置及滅菌、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)制劑的生產(chǎn)。本發(fā)明根據(jù)菌株的特性，將枯草芽孢桿菌菌種與培養(yǎng)基成分混合制成枯草芽孢桿菌培養(yǎng)制劑，采用無(wú)需滅菌、接種和密閉培養(yǎng)條件的開(kāi)放式液體培養(yǎng)方法進(jìn)行小規(guī)模枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)，不僅方便枯草芽孢桿菌制劑用戶(hù)的使用，更能大幅降低單位活菌數(shù)的生產(chǎn)成本，促進(jìn)我國(guó)枯草芽孢桿菌微生態(tài)制劑在飼料和水產(chǎn)行業(yè)的使用，加速我國(guó)發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)的推廣。