[發明專利]一種微型種子消毒轉接方法

在審

• 申請號: 201710096212.8
• 申請日: 2017-02-22
• 公開（公告）號: CN106717307A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 趙學彩;趙紅霞;陳晉鑾;胡東關;李媛媛;劉欣;王凱
• 申請（專利權）人: 山東博華高效生態農業科技有限公司
• 主分類號: A01C1/08
• 分類號: A01C1/08;A01C1/00;A01G9/10
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司37205
• 代理人: 苗峻

技術領域

本發明涉及種苗繁育技術領域，具體涉及一種微型種子消毒轉接方法。

背景技術

目前，實生苗組培技術在新品種選育領域應用廣泛，尤其應用于發育不完全的種子。常用的種子無菌播種有點播、撒播，而相對較小的微型種子（直徑小于1mm）通常采用果莢消毒法，即在果莢開裂之前采收，對其進行消毒，消毒后剝去果莢進行無菌播種，該方法無法保證果莢內微型種子的成熟度及品質,這主要是由于微型種子如蝴蝶蘭、白芨等充分成熟時果夾會開裂，在開裂前不能保證其成熟度和品質。因此，研究一種微型種子直接消毒轉接的方法顯得尤為重要。

發明內容

根據現有技術的不足，本發明的目的在于研究一種微型種子消毒轉接的方法，采用本發明可有效解決微型種子播種不均勻，密度較大，勤于分瓶的難題。

一種微型種子消毒轉接方法，它包括以下幾個步驟：

1）種子的收集：

將進行無菌轉接的微型種子，在果莢略微發黃、扭曲還未開裂時進行套袋，收集成熟飽滿的種子，置于4℃冰箱備用；

2）無菌材料的準備：

將1.5ml離心管，無菌水，0.1%-0.2%瓊脂，1000μL移液槍頭，121℃，20min進行高溫滅菌，冷卻備用;

3）種子的消毒處理：

將步驟1）獲得的種子取適量（不要多于離心管1/10的體積）裝于1.5mL離心管，加入1mL無菌水，震蕩10-30s，4000-6000r/s離心30s,將上清及漂浮的未成熟種子棄掉；向離心管中加入1mL70-75%酒精，震蕩10s,4000-6000r/s離心15s（為保證種子活性，酒精接觸時間不超30s），用移液槍小心去除上清；加入1mL無菌水，震蕩10-30s，4000-6000r/s離心30s，去上清，重復2-3次洗去酒精；向離心管中加入1mL0.1% HgCl₂，強力震蕩滅菌3-5min， 4000-6000r/s離心30s，去上清；加入1mL無菌水，強力震蕩1min，4000-6000r/s離心30s，去上清，重復3-5次，去除HgCl₂后備用；

本步驟中采用的轉速為4000-6000r/s ，轉速過低成熟種子不能離心沉積，轉速過高干癟種子不能漂浮；

本步驟中采用的滅菌時間為3-5min，若滅菌時間過短消毒不徹底，滅菌時間過長種子受HgCl₂毒害，活性降低。

）無菌種子的轉接：

向步驟3）獲得的盛無菌種子的離心管中加入1mL-1.5mL的0.1%-0.2%瓊脂，用移液槍吸打至種子均勻懸浮后吸取懸浮液，依據播種密度，將懸浮液滴于固體培養基表面，輕輕晃動培養基，直至懸浮液均勻分布于固體培養基表面。在超凈工作臺中晾至懸浮液凝固即可封口、標記。

本步驟中使用的0.1%-0.2%瓊脂能夠保證微型種子充分懸浮，濃度過低不能使種子懸浮，濃度過高易造成懸浮液凝固，不利于播種。

）無菌種子的培養：

將步驟4）獲得的無菌種子培養至長出兩片真葉后即可分瓶進行壯苗、生根培養，此為通過組培技術獲得的實生苗。

本發明所述的壯苗、生根培養均為現有技術。

本發明的有益效果： 本發明在果莢開裂后，進行微型種子的收集、消毒、轉接，培養獲得一種微型種子(直徑小于1mm)在實生苗組培過程中消毒播種方法。本發明的具體優點如下：第一，微型種子直接消毒法解決了果莢開裂后，微型種子消毒難的問題；第二，解決了微型種子播種不均勻，密度較大，勤于分瓶的難題。該方法能夠保證微型種子完全成熟后播種，提高萌發率；播種時保證微型種子均勻平鋪，疏密可控，受光均勻，在雜交選育及實生苗生產中具有很好的技術效果和推廣前景。

具體實施方式

一種微型種子消毒轉接方法，其中本實施例中的微型種子為蝴蝶蘭種子，它包括以下幾個步驟：

（1）選取蝴蝶蘭雜交140天的果莢，進行套袋處理，10天后收集到成熟飽滿、自然開裂的蝴蝶蘭種子，置于4℃冰箱備用；

（2）將1.5ml離心管，無菌水，0.1%瓊脂，1000μL移液槍頭裝袋封口后，進行高溫滅菌，冷卻備用。