[發明專利]一種微型種子消毒轉接方法

在審

• 申請號: 201710096212.8
• 申請日: 2017-02-22
• 公開（公告）號: CN106717307A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 趙學彩;趙紅霞;陳晉鑾;胡東關;李媛媛;劉欣;王凱
• 申請（專利權）人: 山東博華高效生態農業科技有限公司
• 主分類號: A01C1/08
• 分類號: A01C1/08;A01C1/00;A01G9/10
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司37205
• 代理人: 苗峻

1.一種微型種子消毒轉接方法，其特征在于：它包括以下幾個步驟：

（1）種子的收集：

將進行無菌轉接的微型種子，在果莢略微發黃、扭曲還未開裂時進行套袋，收集成熟飽滿的種子，置于4℃冰箱備用；

（2）無菌材料的準備：

將1.5ml離心管，無菌水，0.1%-0.2%瓊脂，1000μL移液槍頭在121℃高溫下進行滅菌20min，然后冷卻備用；

（3）種子的消毒處理：

將步驟（1）獲得的微型種子取適量（不要多于離心管1/10的體積）裝于1.5mL離心管，加入1mL無菌水，震蕩10-30s，4000-6000r/s離心30s，將上清及漂浮的未成熟種子棄掉；向離心管中加入1mL70-75%酒精，震蕩10s,4000-6000r/s離心15s，用移液槍小心去除上清；加入1mL無菌水，震蕩10-30s，4000-6000r/s離心30s，去上清，重復2-3次；向離心管中加入1mL0.1% HgCl₂溶液，強力震蕩3-5min, 4000-6000r/s離心30s，去上清；加入1mL無菌水，強力震蕩1min，4000-6000r/s離心30s，去上清，重復3-5次備用；

（4）無菌種子的轉接：

向步驟（3）獲得的盛無菌種子的離心管中加入1mL-1.5mL的0.1%-0.2%瓊脂，用移液槍吸打至種子均勻懸浮后吸取懸浮液，依據播種密度，將懸浮液滴于固體培養基表面，輕輕晃動培養基，直至懸浮液均勻分布于固體培養基表面，在超凈工作臺中晾至懸浮液消失即可封口、標記；

（5）無菌種子的培養：

將步驟（4）獲得的無菌種子培養至長出兩片真葉后即可分瓶進行壯苗、生根培養，此為通過組培技術獲得的實生苗。

2.根據權利要求1所述的微型種子消毒轉接方法，其特征在于：所述的微型種子為白芨種子、蝴蝶蘭種子、霍山石斛種子。