[發(fā)明專利]一種發(fā)酵生產(chǎn)去甲萬(wàn)古霉素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710092838.1
• 申請(qǐng)日: 2017-02-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106801078B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張雪霞;任風(fēng)芝;李曉露;王耀耀;趙穎;耿文飛;王海燕;李麗紅;李寧;高月麒;鄭智慧;段寶玲;路新華;高任龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華北制藥集團(tuán)新藥研究開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12P21/02
• 分類號(hào): C12P21/02;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)去甲萬(wàn)古霉素的方法。該方法通過(guò)1）優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方；2）在發(fā)酵合成去甲萬(wàn)古霉素期間添加超順磁性微球，降低發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)產(chǎn)生菌的反饋抑制，促進(jìn)去甲萬(wàn)古霉素的生物合成。發(fā)酵結(jié)束后，去甲萬(wàn)古霉素的發(fā)酵單位可達(dá)到22593μg/ml，與不添加超順磁性微球相比，去甲萬(wàn)古霉素產(chǎn)量提高了35%以上，提高了產(chǎn)能和設(shè)備利用率，降低了廢水和廢渣的排放。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)去甲萬(wàn)古霉素的方法。

背景技術(shù)

鹽酸去甲萬(wàn)古霉素是我國(guó)唯一一個(gè)自主研制并成功應(yīng)用于臨床的糖肽類抗生素，由鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生，用于治療革蘭氏陽(yáng)性菌感染。去甲萬(wàn)古霉素具有和萬(wàn)古霉素類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)、藥理性質(zhì)、抗菌活性和抗菌譜，其作用機(jī)制為抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，是臨床上治療由甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌引起的嚴(yán)重感染的首選藥物。

去甲萬(wàn)古霉素分子由兩個(gè)基本結(jié)構(gòu)組成，即糖基部分α-o-vancosamine-β-o-glucosyl和肽基部分的中心七肽核，在臨床上使用的是去甲萬(wàn)古霉素鹽酸鹽，分子式為C₆₅H₇₃Cl₂N₉O₂₄·HCl，分子量為1471.71。鹽酸去甲萬(wàn)古霉素為白色或類白色無(wú)定形粉末，極易溶于水，可溶于含水甲醇，不溶于高級(jí)醇類、丙酮或乙醚，低濃度尿素可增加其水溶解度。

去甲萬(wàn)古霉素為微生物發(fā)酵的次級(jí)代謝產(chǎn)物，存在于發(fā)酵液中，去甲萬(wàn)古霉素不僅對(duì)其他生物有殺死或抑制作用，對(duì)產(chǎn)生菌自身也有殺死或抑制作用，即抗生素對(duì)產(chǎn)生菌自身存在著毒害作用。隨著去甲萬(wàn)古霉素在發(fā)酵液中濃度不斷增高，其產(chǎn)生菌受到高濃度產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)作用，使產(chǎn)生菌生物細(xì)胞及酶的潛力不能充分發(fā)揮，造成去甲萬(wàn)古霉素的產(chǎn)率難以提高，從而成為制約提高去甲萬(wàn)古霉素發(fā)酵水平的瓶頸。向發(fā)酵液中添加大孔吸附樹(shù)脂可降低發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)產(chǎn)生菌的反饋抑制，但存在大孔吸附樹(shù)脂和菌絲混在一起，無(wú)法有效分離的問(wèn)題，將菌絲體和大孔吸附樹(shù)脂用有機(jī)溶媒浸泡提取，有機(jī)溶媒用量大，且大孔吸附樹(shù)脂無(wú)法回收。

酵母粉和棉籽蛋白粉，是近年發(fā)展起來(lái)的有機(jī)氮源。其中棉籽蛋白粉是一種以特定地區(qū)的優(yōu)質(zhì)棉籽為原料，采用先進(jìn)的技術(shù)生產(chǎn)的高蛋白、低酚、低纖維、微生物利用效果好的有機(jī)氮源，產(chǎn)品的蛋白含量在50%以上，氨基酸組成占總氮的90%以上，游離棉酚的含量控制在600ppm以下，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。酵母粉為標(biāo)準(zhǔn)化有機(jī)氮源，蛋白質(zhì)含量高（蛋白質(zhì)占干菌體總重50%以上），含有18種氨基酸，種類齊全，維生素和礦物質(zhì)等含量豐富。但未見(jiàn)有報(bào)道將兩種有機(jī)氮源配合應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中微生物發(fā)酵制備去甲萬(wàn)古霉素存在的高濃度產(chǎn)物對(duì)產(chǎn)生菌的反饋抑制及發(fā)酵水平低的問(wèn)題，提供一種通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方、發(fā)酵條件，并在發(fā)酵過(guò)程中添加超順磁性微球，以吸附發(fā)酵液中去甲萬(wàn)古霉素，降低對(duì)產(chǎn)生菌的反饋抑制，促進(jìn)去甲萬(wàn)古霉素的生物合成，來(lái)提高去甲萬(wàn)古霉素產(chǎn)量的方法。

本發(fā)明的關(guān)鍵構(gòu)思為：采用河北擬無(wú)枝酸菌菌株為出發(fā)菌株，在微生物發(fā)酵生產(chǎn)去甲萬(wàn)古霉素的過(guò)程中，優(yōu)化發(fā)酵配方，添加超順磁性微球，優(yōu)化超順磁性微球的加入時(shí)間、加入量、預(yù)處理方式等條件，吸附發(fā)酵液中去甲萬(wàn)古霉素，降低對(duì)產(chǎn)生菌的反饋抑制，提高去甲萬(wàn)古霉素產(chǎn)量。

本發(fā)明所提供的一種發(fā)酵生產(chǎn)去甲萬(wàn)古霉素的方法，包括以下步驟：

a、制備河北擬無(wú)枝酸菌菌種的種子液

將河北擬無(wú)枝酸菌菌種的斜面培養(yǎng)物或孢子液接種于種子培養(yǎng)基，26-30℃、在搖瓶或發(fā)酵罐中培養(yǎng)48-72 h獲得種子液。