[發明專利]一種檢測MTHFR基因突變的核酸組合及其應用和試劑盒

有效

• 申請號: 201710091983.8
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106801099B
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 廖瑋;莫亞勤;林曉燕;張晨光
• 申請（專利權）人: 北京易活生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 苗燕

本發明公開了一種檢測MTHFR基因突變的核酸組合及其應用和試劑盒，屬于基因檢測技術領域。該檢測MTHFR基因突變的核酸組合，其包括SEQ ID NO.1?2所示的下游引物中的一種或兩種、SEQ ID NO.3所示的上游引物以及SEQ ID NO.4所示的捕獲探針，下游引物的5’端或上游引物的5’端標記有用于結合催化酶的親和物。該核酸組合可針對MTHFR基因的C677T突變位點進行檢測，其具有檢測靈敏度高、特異性強、成本低、操作便捷等特點。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，具體而言，涉及一種檢測MTHFR基因突變的核酸組合及其應用和試劑盒。

背景技術

MTHFR(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase)全稱為5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶，是葉酸和同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代謝的一個關鍵酶。位于第一號染色體1p36.3位置。MTHFR全長19.3kb，共有外顯子12個，mRNA全長7,105bp，編碼657個氨基酸殘基組成的蛋白，它的主要生化功能是催化5，10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸。MTHFR基因主要存在兩種多態類型，分別為常見的C677T rs1801133、A1298Crs1801131，另外葉酸代謝循環上還有MTRR基因的A66G rs1801394位點。但實際上只有677位點的多態性與疾病及藥物代謝的的關系是被公認的，并且被寫入《醫療機構臨床檢驗項目目錄(2013年版)》中，該目錄沒有包括其他2個位點的檢測，研究認為，以上位點多態性與多種疾病相關。

葉酸在細胞功能、分裂和分化中起著重要的作用，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)能夠參與葉酸代謝通路，催化5，10-亞甲基四氫葉酸轉換成5-甲基四氫葉酸鹽，使之參與同型半胱氨酸通路，為同型半胱氨酸提供甲基形成甲硫氨酸，進一步形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，對維持細胞正常周期和細胞活性有著重要的作用。如果這兩種途徑所涉及到的酶發生缺陷或缺失，將導致通路的阻塞，使血液中的同型半胱氨酸的濃度增加，對血管壁產生損傷。同型半胱氨酸向甲硫氨酸的轉換就會發生障礙，相繼引發出一系列病理變化：(1)同型半胱氨酸堆積，導致甲基化作用的減弱，這就直接影響50多種重要物質的合成；(2)高濃度的同型半胱氨酸能損害血管的內皮細胞，成為重要的心腦血管致病因素；(3)高濃度的同型半胱氨酸作用于敏感的胚胎神經細胞，可造成無腦畸形和脊柱裂等不可逆損害；(4)同型半胱氨酸溶解性小，易于在泌尿系統形成結石。

在MTHRF基因多態性與出生缺陷關系的研究中，幾乎所有的焦點都集中于神經管缺陷(NTD)，盡管MTHRF基因突變頻率在不同國家和民族分布不同，但來自不同地區的大量研究均證實母親MTHRF C677T突變是生育神經管缺陷患兒的遺傳風險因素。一項分別對母親、胎兒及父親的MTHRF C677T突變研究表明，母親677C/T純合突變使出生神經管缺陷嬰兒的風險升高2倍，胎兒677T/T純合突變使NTD風險升高1.6倍。與MTHRF基因多態性關系密切的另一種出生缺陷是唐氏綜合征。資料顯示唐氏綜合征患者的第3條21號染色體93％是母源性的，因此母親的基因或代謝異常是發生唐氏綜合征的主要風險因素。近年來的許多研究表明母親MTHRF基因突變可導致MTHRF活性降低，使作為甲基間接工體的5-甲基四氫葉酸生成障礙，從而導致DNA的低甲基化和染色體異常。此外，MTHFR基因C677T位點多態性與非綜合征性唇腭裂的發生存在關聯。