[發(fā)明專利]一種用于豬孤雌激活胚的體外培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710090092.0
• 申請日: 2017-02-20
• 公開（公告）號: CN106834216B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張德福;戴建軍;張樹山;吳彩鳳;陳亞寧;王文杰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京市領(lǐng)專知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11590
• 代理人: 林輝輪

1.一種用于豬孤雌激活胚的體外培養(yǎng)液，其特征在于：所述體外培養(yǎng)液的原料包括mPZM-3胚胎培養(yǎng)液及五水乳酸鈣和丙酮酸鈉，且所述體外培養(yǎng)液中五水乳酸鈣的濃度為0.606g/L，丙酮酸鈉的濃度為0.022g/L；所述體外培養(yǎng)液所用溶劑為富氫水，且其中H₂的含量為1.2～1.6ppm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于豬孤雌激活胚的體外培養(yǎng)液，其特征在于，所述mPZM-3胚胎培養(yǎng)液的原料包括mPZM-3基礎(chǔ)培養(yǎng)液、L-谷氨酰胺、亞?；撬帷-半胱氨酸、青霉素、硫酸鏈霉素以及牛血清白蛋白，且它們的配比為1L：0.146g：0.546g：0.069g：100000IU：70000IU：3g；所述mPZM-3胚胎培養(yǎng)液所用溶劑為富氫水，且其中H₂的含量為1.4ppm。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于豬孤雌激活胚的體外培養(yǎng)液，其特征在于，所述mPZM-3基礎(chǔ)培養(yǎng)液包括如下濃度的溶質(zhì)：氯化鈉6.312g/L，碳酸氫鈉2.119g/L，氯化鉀0.746g/L，磷酸二氫鉀0.048g/L，硫酸鎂0.048g/L；還包括2％的必需氨基酸和1％的非必需氨基酸。

4.一種權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的體外培養(yǎng)液用于培養(yǎng)豬孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將豬孤雌激活胚胎在含5μmol/L細(xì)胞松弛素B的體外培養(yǎng)液中洗三次，移入含5μmol/L細(xì)胞松弛素B的體外培養(yǎng)液中培養(yǎng)3～5h；

(2)將上述處理后的胚胎用不含細(xì)胞松弛素B的培養(yǎng)液洗三次，移入不含細(xì)胞松弛素B的體外培養(yǎng)液中培養(yǎng)168h，至所述胚胎發(fā)育成囊胚。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種體外培養(yǎng)液用于培養(yǎng)豬孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步驟(1)中所述豬孤雌激活胚胎在含5μmol/L細(xì)胞松弛素B的體外培養(yǎng)液中培養(yǎng)處理的時(shí)間為4h。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種體外培養(yǎng)液用于培養(yǎng)豬孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步驟(1)中所述豬孤雌激活胚胎的培養(yǎng)密度為每500μL體外培養(yǎng)液培養(yǎng)40～60枚胚胎。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種體外培養(yǎng)液用于培養(yǎng)豬孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步驟(2)中的培養(yǎng)條件為38.5℃，5％CO₂，飽和濕度。