[發(fā)明專利]一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710089556.6 | 申請日： | 2017-02-20 |
| 公開（公告）號： | CN106755524B | 公開（公告）日： | 2019-08-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周衛(wèi)川;王沛;王宇;林俊宏;林陽武 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學(xué)俊;陳彩芳 |
| 地址： | 350003 福建省*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 熒光 定量 pcr 檢測 鑒定 比薩 蝸牛 方法 | ||
1.一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：所述方法是應(yīng)用特異性引物及探針對比薩茶蝸牛的分子特征進(jìn)行識別，所述引物及探針為：
上游引物為TPF：5’- GCTGGAAAGTGGAGGCCGTA -3’，
下游引物為TPR：5’- GCGGCGTCGGTTAAGAGAGA-3’，
熒光探針為TPP：5’-FAM-AGCTGTTCCGGGCACCAAGACGTCACG-BHQ-3’，5’端標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)是FAM，3’端標(biāo)記的熒光淬滅基團(tuán)是BHQ，
以上引物及探針濃度均為10μmol/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：利用權(quán)利要求1所述的引物及探針進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系總體積為25μL，其中2×TaqMan PCR Master Mix 12.5μL，上、下游引物及探針各1μL，DNA模板2μL，余下用滅菌ddH2O補(bǔ)足。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：所述熒光定量PCR反應(yīng)的程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；95℃ 10s，60℃ 34s，40個循環(huán)；結(jié)束反應(yīng)；結(jié)果判定：反應(yīng)結(jié)束后根據(jù)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果，若待測樣品產(chǎn)生典型的擴(kuò)增曲線，且Ct值小于35，則判定待測樣品為比薩茶蝸牛，反之，則不是。
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