[發明專利]一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法有效
| 申請號： | 201710089556.6 | 申請日： | 2017-02-20 |
| 公開（公告）號： | CN106755524B | 公開（公告）日： | 2019-08-23 |
| 發明（設計）人： | 周衛川;王沛;王宇;林俊宏;林陽武 | 申請（專利權）人： | 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 福州元創專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學俊;陳彩芳 |
| 地址： | 350003 福建省*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 熒光 定量 pcr 檢測 鑒定 比薩 蝸牛 方法 | ||
1.一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：所述方法是應用特異性引物及探針對比薩茶蝸牛的分子特征進行識別，所述引物及探針為：
上游引物為TPF：5’- GCTGGAAAGTGGAGGCCGTA -3’，
下游引物為TPR：5’- GCGGCGTCGGTTAAGAGAGA-3’，
熒光探針為TPP：5’-FAM-AGCTGTTCCGGGCACCAAGACGTCACG-BHQ-3’，5’端標記的熒光報告基團是FAM，3’端標記的熒光淬滅基團是BHQ，
以上引物及探針濃度均為10μmol/L。
2.根據權利要求1所述的一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：利用權利要求1所述的引物及探針進行熒光定量PCR反應，反應體系總體積為25μL，其中2×TaqMan PCR Master Mix 12.5μL，上、下游引物及探針各1μL，DNA模板2μL，余下用滅菌ddH2O補足。
3.根據權利要求2所述的一種熒光定量PCR檢測鑒定比薩茶蝸牛的方法，其特征在于：所述熒光定量PCR反應的程序為：95℃預變性5min；95℃ 10s，60℃ 34s，40個循環；結束反應；結果判定：反應結束后根據擴增曲線判定結果，若待測樣品產生典型的擴增曲線，且Ct值小于35，則判定待測樣品為比薩茶蝸牛，反之，則不是。
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