[發明專利]靶向NY-ESO-1的T細胞受體及其用途

在審

• 申請號: 201710088785.6
• 申請日: 2017-02-20
• 公開（公告）號: CN108456247A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 黃飛;金濤;王海鷹;何鳳;史子嘯
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K19/00;C12N15/12;C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61P35/00
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本發明公開了一種靶向NY?ESO?1的T細胞受體及其用途。由NY?ESO?1 TCRα鏈、P2A、NY?ESO?1 TCRβ鏈串聯構成。該T細胞受體用于修飾人的T淋巴細胞，修飾后的T細胞(TCR?T細胞)能用于表達HLA?A2+NY?ESO?1陽性腫瘤的治療。本發明制備的NY?ESO?1 TCR?T細胞對特異性腫瘤細胞(U266、T2?NY?ESO?1)都具強烈的功能，CD107a表達和IFNγ分泌較高，效靶比是5:1的情況下對U266殺傷效率達到80％。

技術領域

本發明屬于T細胞受體領域，具體涉及靶向NY-ESO-1的T細胞受體及其用途。

背景技術

近年來人們在篩選腫瘤特異性抗原方面取得了很大進展，發現了大量腫瘤相關抗原和腫瘤特異性抗原。1991年比利時的Boon教授和他的同事們首先發現的腫瘤睪丸(cancer-testis antigen，CT)抗原，CT是目前鑒定出來的腫瘤特異性抗原中數目最多的一類，它們具有以下共同特征：一般在正常組織中不表達；在肝癌、惡性黑色素瘤、肺癌等多種腫瘤中有不同強度的表達；編碼基因位于X染色體上。由于上述特點，CT抗原被認為是腫瘤特異性的共享抗原。

CT抗原包括黑色素瘤抗原(MAGE)家族、SSX基因家族、LAGE、GAGE、CTp11和NY-ESO-l等，NY-ESO-1是由Chen Y.T.等使用重組cDNA文庫血清學分析技術從食管癌cDNA表達文庫中篩出來的一種腫瘤共享抗原。NY-ESO-1基因家族至少擁有3個成員，他們分別是NY-ESO-1、LAGE-1和ESO3，基因均定位于Xq28。NY-ESO-1基因轉錄的mRNA最長747bp，表達的蛋白質相對分子質量為18KD，由180個氨基酸組成，其C端存在一疏水性氨基酸尾，在NY-ESO-1蛋白上有潛在的跨膜區域。采用RT-PCR和免疫組織化學法檢測NY-ESO-l mRNA及其蛋白的表達情況，研究者對NY-ESO-1在各個系統的腫瘤的表達進行了研究，結果表明NY-ESO-1在各腫瘤表達頻率不一，在神經母細胞瘤、滑膜肉瘤、惡性黑素瘤、卵巢癌等腫瘤組織中表達較高，在結直腸癌、肝癌、尿路上皮癌、多發性骨髓瘤、肺癌中也有不同程度的表達，但在一些類型的腫瘤如直腸癌、腎癌、白血病及淋巴瘤組織中NY-ESO-1的表達較低，甚至不表達。NY-ESO-1在正常組織中也有表達，主要表達于睪丸和卵巢，低表達于子宮，但是由于血睪屏障的存在，正常組織遭受的免疫毒性能得到有效控制。NY-ESO-l的表達特征，展現了良好的臨床應用前景，成為了國內外學者的研究重點。近年來，NY-ESO-l是過繼性免疫治療的重要靶點。

由于難以從大多數腫瘤患者體內獲得對腫瘤抗原有高親和力和特異性的腫瘤反應性T細胞。研究者逐漸嘗試通過基因工程的方法，將可識別腫瘤抗原的特異性TCR基因導入患者T細胞，從而獲得特異性TCR基因轉染T細胞。即通過對患者無能T細胞抗原特異性的再定向(redirect)，獲得腫瘤反應性T細胞。從根本上說，TCR是T細胞識別抗原的分子基礎。就占外周血T淋巴細胞總數的80％以上的α⁺β⁺T細胞而言。其TCR分子由α、β雙鏈構成，TCRα鏈和β鏈都在蛋白結構上均由可變區(V區)和恒定區(C區)兩部分組成，其中V區是識別抗原肽/MHC復合物(pMHC)的關鍵部位。TCRα鏈和β鏈的V區各含有三個與免疫球蛋白的V區結構類似的高變區，也稱互補決定區(Complementarity Determining Region，CDR)，一般用CDRl、CDR2和CDR3表示。另外，TCRVβ鏈還含有第四個高變區CDR4。通過基因重排等機制形成的具有極高多樣性的TCR決定了T細胞識別抗原的多樣性，使成熟T細胞表達的TCRαβ雙鏈組成了一個能與成千萬種抗原(理論上可達到10¹⁴級)結合的抗原識別受體庫(repertoire)