[發(fā)明專(zhuān)利]基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時(shí)檢測(cè)食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法

在審

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• 申請(qǐng)日: 2017-02-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106970048A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);齊崴;王利兵
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);王利兵;齊崴
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/552
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/552;G01N33/543
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)12214
• 代理人: 陳昌娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時(shí)檢測(cè)食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法。

背景技術(shù)

隨著生活水平的提高，人們對(duì)食品的質(zhì)量與安全狀況更為關(guān)心。然而，目前食品安全問(wèn)題時(shí)有發(fā)生，特別是在食品中農(nóng)獸藥殘留方面，依然十分普遍，這也成為了食品安全最大的風(fēng)險(xiǎn)。面對(duì)農(nóng)獸藥殘留的嚴(yán)峻形勢(shì)，合理高效地分析檢測(cè)是保障食品安全、控制農(nóng)獸藥殘留的重要環(huán)節(jié)。

其中，基于表面等離子共振技術(shù)(Surface Plasmon Resonance，SPR)開(kāi)發(fā)的生物傳感器具有無(wú)需標(biāo)記、高靈敏、快速檢測(cè)等特點(diǎn)，是食品安全檢測(cè)的理想工具之一。但是，在低分子量物質(zhì)的檢測(cè)方面，SPR仍存在信噪比大、響應(yīng)值小、靈敏度低等不足，而食品中農(nóng)獸藥殘留大部分分子量較低，如西維因，鏈霉素等。此外，食品中殘留的農(nóng)獸藥不止一種，使得傳統(tǒng)的檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜繁瑣，單檢測(cè)通道的SPR傳感器無(wú)法滿足同時(shí)檢測(cè)多種農(nóng)獸藥殘留組分的要求。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)基于SPR技術(shù)的新型檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)食品中多種農(nóng)獸藥殘留的高靈敏、快速、同時(shí)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)，能夠快速高效的同時(shí)檢測(cè)食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時(shí)檢測(cè)食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法，包括下述步驟：

(1)傳感芯片表面包被原或抗體的固定：將各農(nóng)獸藥殘留組分的包被原或抗體混合至混合液的體積為50-150μL，所述各包被原或抗體在所述混合液中的濃度均為5-20μg/mL，再利用活化酯法(EDC/NHS)將所述混合液固定在所述傳感芯片表面；

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用0.01-0.1mol/L、pH范圍為6-8的羥乙基哌嗪乙硫磺酸鹽緩沖液(HBS緩沖液)配置各農(nóng)獸藥殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液的濃度均為0.1-1mg/mL；

量取所述標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液，配制其相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)原液；用HBS緩沖液將所述標(biāo)準(zhǔn)原液配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取不同濃度待測(cè)殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過(guò)量的固定濃度的相應(yīng)抗體或包被原混合孵化，得到不同濃度的待測(cè)物混合液；

(3)測(cè)試再生液洗脫能力：測(cè)試HCl溶液、NaOH溶液、氯化鎂溶液以及甘氨酸-鹽酸溶液對(duì)于步驟(1)得到的傳感芯片表面各殘留組分抗體的洗脫情況；

(4)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：

單組分的檢測(cè)：通入50-100μL步驟(2)制備的不同濃度的所述待測(cè)物混合液，記錄表面等離子體共振傳感器的響應(yīng)信號(hào)變化，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得單組分回歸曲線的方程；再依次測(cè)得其它殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及單組分回歸曲線的方程；

多組分檢測(cè)：將多種步驟(2)制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過(guò)量的抗體或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50-100μL，進(jìn)樣，記錄下總體的響應(yīng)信號(hào)變化，然后按照步驟(3)的測(cè)試結(jié)果，依再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄響應(yīng)值變化；根據(jù)不同濃度孵化后的混合液及其相應(yīng)再生后殘留抗體或包被原的響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線并擬合，獲得多組分回歸曲線的方程；

(5)定量檢測(cè)：對(duì)于未知含量的含多種殘留組分的未知樣品進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，向所述未知樣品的待測(cè)液中分別加入過(guò)量的抗體或包被原，混合孵化后進(jìn)樣，記錄總體的響應(yīng)值變化；按照再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄芯片表面每次殘留抗體或包被原的響應(yīng)值變化；將殘留抗體或包被原的響應(yīng)值代入步驟(4)得到的多組分檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線以及相應(yīng)的單組分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算各殘留組分的濃度值；

(6)通入0.01-0.02mol/L、pH值為1.2-2.5的甘氨酸-鹽酸緩沖溶液使芯片再生，再生后的芯片用于后續(xù)檢測(cè)。

優(yōu)選的是，步驟(2)中，所述的pH值為7.4。

優(yōu)選的是，步驟(5)中，標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液與過(guò)量抗體或包被原的混合孵化時(shí)間為5-10分鐘。

在上述方法的步驟(1)中，當(dāng)傳感芯片表面固定的是包被原的混合液時(shí)，在后續(xù)步驟中進(jìn)行混合孵化時(shí)就采用抗體。反之，在上述方法的步驟(1)中，當(dāng)傳感芯片表面固定的是抗體的混合液時(shí)，在后續(xù)步驟中進(jìn)行混合孵化時(shí)就采用包被原。