[發(fā)明專利]基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時檢測食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710087667.3
• 申請日: 2017-02-17
• 公開（公告）號: CN106970048A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);齊崴;王利兵
• 申請（專利權(quán)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);王利兵;齊崴
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552;G01N33/543
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)12214
• 代理人: 陳昌娟

1.一種基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時檢測食品中多種農(nóng)獸藥殘留的方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)傳感芯片表面包被原或抗體的固定：將各農(nóng)獸藥殘留組分的包被原或抗體混合至混合液的體積為50-150μL，所述各包被原或抗體在所述混合液中的濃度均為5-20μg/mL，再利用活化酯法將所述混合液固定在所述傳感芯片表面；

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用0.01-0.1mol/L、pH范圍為6-8的羥乙基哌嗪乙硫磺酸鹽緩沖液配置各農(nóng)獸藥殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品儲備液，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品儲備液的濃度均為0.1-1mg/mL；

量取所述標(biāo)準(zhǔn)樣品儲備液，配制其相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)原液；用羥乙基哌嗪乙硫磺酸鹽緩沖液將所述標(biāo)準(zhǔn)原液配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取不同濃度待測殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過量的固定濃度的相應(yīng)抗體或包被原混合孵化，得到不同濃度的待測物混合液；

(3)測試再生液洗脫能力：測試HCl溶液、NaOH溶液、氯化鎂溶液以及甘氨酸-鹽酸溶液對于步驟(1)得到的傳感芯片表面各殘留組分抗體的洗脫情況；

(4)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：

單組分的檢測：通入50-100μL步驟(2)制備的不同濃度的所述待測物混合液，記錄表面等離子體共振傳感器的響應(yīng)信號變化，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得單組分回歸曲線的方程；再依次測得其它殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及單組分回歸曲線的方程；

多組分檢測：將多種步驟(2)制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過量的抗體或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50-100μL，進(jìn)樣，記錄下總體的響應(yīng)信號變化，然后按照步驟(3)的測試結(jié)果，依再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄響應(yīng)值變化；根據(jù)不同濃度孵化后的混合液及其相應(yīng)再生后殘留抗體或包被原的響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線并擬合，獲得多組分回歸曲線的方程；

(5)定量檢測：對于未知含量的含多種殘留組分的未知樣品進(jìn)行同時檢測，向所述未知樣品的待測液中分別加入過量的抗體或包被原，混合孵化后進(jìn)樣，記錄總體的響應(yīng)值變化；按照再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄芯片表面每次殘留抗體或包被原的響應(yīng)值變化；將殘留抗體或包被原的響應(yīng)值代入步驟(4)得到的多組分檢測的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線以及相應(yīng)的單組分檢測標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算各殘留組分的濃度值；

(6)通入0.01-0.02mol/L、pH值為1.2-2.5的甘氨酸-鹽酸緩沖溶液使芯片再生，再生后的芯片用于后續(xù)檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述的pH值為7.4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟(5)中，標(biāo)準(zhǔn)樣品儲備液與過量抗體或包被原的混合孵化時間為5-10分鐘。